DB3401_T 340-2024 玉米单倍体DH系育种 芽苗加倍法.docxVIP

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3401

安徽省合肥市地方标准

DB3401/T340—2024

玉米单倍体DH系育种芽苗加倍法

BreedingofmaizehaploidDHlines—Budandseedlingdoublingmethod

2024-12-23发布2024-12-23实施

合肥市市场监督管理局发布

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构部不承担识别专利的责任。

本文件由合肥市农业农村局提出并归口。

本文件起草单位：合肥丰乐种业股份有限公司、安徽农业大学。

本文件主要起草人:徐丽媛、马庆、崔明亮、任正鹏、王利明、赵阳、李晓玉、蔡荣号、顾龙江、佘宁安、乔东利、韩青成、胡文黎、孟令来、王丽梅、马小川、刘芳。

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玉米单倍体DH系育种芽苗加倍法

1范围

本文件描述了玉米单倍体DH系的芽苗加倍育种方法。

本文件适用于采用芽苗加倍法开展的玉米单倍体DH系育种。

4.3试剂与材料

秋水仙素、二甲基亚砜（DMSO）、乙醇、次氯酸钠溶液、营养土。试剂均为分析纯。

5方法与步骤

5.1单倍体加倍

5.1.1催芽

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单倍体种子带有明显的颜色标记，籽粒糊粉层着色、盾状体无色素。人工挑选出玉米单倍体种子，使用数粒仪进行数粒，并记录。将挑选好的种子倒入不锈钢方盆中使用自来水清洗，去除杂质后使用75%乙醇消毒1min，再用2%次氯酸钠溶液消毒10min，倒出消毒水之后用纯水清洗3次。纯水规格按照GB/T6682的规定执行。

灭菌湿毛巾平铺在消过毒的不锈钢方盆中，在湿毛巾上放一张发芽纸，将消毒洗净的种子平铺在发芽纸上，上面使用灭菌湿毛巾盖好，并扣同样大小的盆，置入发芽箱中，保持箱内湿度50%-80%、温度25℃~28℃。

5.1.2切芽

发芽后第4天开始观察，去除根部和芽尖有红色的假单倍体种子，将长至2cm以上玉米幼芽切除芽鞘

尖端中空部分后，放入纱网袋中。

5.1.3秋水仙素配置

取1g秋水仙素溶解于33.33ml无菌的二甲基亚砜（DMSO）溶液中，过滤除菌后加无菌水定容为0.06%浓度的母液，放于棕色瓶中避光保存，0℃~4℃冰箱里保存备用，保质期约一年。无菌水规格按照GB/T6682的规定执行，秋水仙素配置按GB19489的规定执行。

5.1.4种子芽浸泡

向水桶中倒入配置好的0.06%秋水仙素溶液，漫过切好的种子芽，浸泡6h～8h。

5.1.5种子芽清洗

倒出秋水仙素废液，用清水浸泡种子芽30min，再用流水清洗3次（清洗过程中避免伤到芽和根）。清洗后的种子芽及时送至温室进行穴盘移栽。

5.1.6种子芽移栽

每个穴盘中移栽一株苗，使用生根粉灌根，喷洒叶面肥，在幼苗长到4～5片叶时移栽到大田。移栽后保证土壤水分充足、无杂草。

5.1.7加倍材料的筛选及田间管理

5.1.7.1筛选

观察植株高度、颜色和散粉性，在7叶～8叶期去除高大、绿色的植株。

5.1.7.2田间管理

对地块进行精细平整，保证基肥充裕与水分充足，及时追肥、除草、防治病虫害。

5.1.8授粉

5.1.8.1授粉步骤

散粉期每天早晨观察雌穗，雌穗吐丝前进行套袋，当单倍体植株有花药外露并有明显花粉产生时，进行自交授粉。授粉后雌穗替换为不同颜色袋子，次日有花粉时，再进行一次自交授粉，严格套袋。

若雄穗开始散粉，雌穗还未吐丝，则在雌穗包叶上端剪掉1/4左右露出花丝，进行套袋，次日自交授粉。隔天再自交授粉一次。

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5.1.8.2授粉时间

授粉时间宜为晴天上午10:00左右，气温宜在20℃~28℃之间。

5.1.9DH系体籽粒的收获、保存

玉米果穗成熟后单穗收获，干燥后单穗脱粒，在不超过10℃、通风良好的环境中保存，避免籽粒丢失、混杂、损害。

5.2DH系籽粒鉴定及扩繁

5.2.1DH系籽粒播种

单穗籽粒多于5粒时，每粒一个穴孔进行播种；单穗籽粒等于或少于5粒时，可多粒播，确保正常出苗。

5.2.2DH系鉴定

出苗后，如果植株长势整齐一致，且不是杂交种株型，可以确定为纯合DH自交系。若植株分离严重，或带有诱导系标记性状，应及时淘汰。

5.2.3DH