酶细胞原生质体固定化.pptVIP

反应条件激烈，酶分子的多个基团被交联，酶活力损失大。01制备的固定化酶颗粒较小，给使用带来不便。02缺点：将酶用物理的方法包埋在各种载体（高聚物）内。分为：网格型：将酶包埋在高分子凝胶细微网格中。微囊型：将酶包埋在高分子半透膜中。包埋法（entrapment）1）网格型包埋法（gel(lattic)entrapment）又称凝胶包埋法凝胶包埋条件酶活性强度天然凝胶琼脂、海藻酸钙、角叉菜胶、明胶温和不变差合成凝胶聚丙烯酰胺、光交联树脂聚合反应部分失活高使用的多孔载体及其特点海藻酸钙凝胶包埋法：滴至海藻酸钠溶液＋E(orcell)CaCl2溶液中IE(orIC)角叉菜胶包埋法：滴至角叉菜胶＋E(orcell)KCl溶液中IE(orIC)聚丙烯酰胺凝胶包埋法：AP及TEMEDAcr+Bis+E(orcell)IE(orIC)光交联树脂包埋法：光交联树脂预聚物+E(orcell)紫外照射IE(orIC)1（microencapsulation）2）微囊型包埋法将一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜内。半透膜：直径几十微米到几百微米，厚约25nm。半透膜孔径酶分子孔径，小于半透膜孔径的小分子底物和产物可以自由进出，被称为“人工细胞”。又称半透膜包埋法2与网格型包埋法相比，微囊型包埋法的优点：固定化酶颗粒小，有利于底物和产物扩散。半透膜能阻止蛋白质分子渗漏和进入，注入体内既可避免引起免疫过敏反应，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有较大的医学价值。缺点：反应条件要求高,制备成本也较高。包埋法是目前应用最多的一种较理想的方法，与其它固定化方法相比：优点：不与酶蛋白氨基酸残基反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率高。缺点：只适合作用于小分子底物和产物的酶。吸附法共价偶联法交联法包埋法酶的四种固定化方法各种固定化方法的优缺点比较固定化方法吸附法包埋法共价结合法交联法物理吸附法离子吸附法制备难易易易较难难较难结合程度弱中等强强强活力回收高，酶易流失高高低中等再生可能可能不能不能不能费用低低低高中等底物专一性不变不变不变可变可变分类方式固定化细胞分类方式固定化细胞细胞类型微生物植物动物生理状态死细胞:完整细胞,细胞碎片,细胞器活细胞:增殖细胞,静止细胞,饥饿细胞（二）细胞的固定化方法1.固定化细胞的分类2.固定化方法直接固定法不使用载体，借助物理（如加热、冰冻）、化学方法（如柠檬酸、各种絮凝剂）将细胞直接固定。一般只用于单酶或少数几种酶催化的反应。吸附法（固定化动物细胞的主要方法）包埋法（凝胶包埋）原生质体的制备收集对数生长期的细胞悬浮于高渗溶液中加入细胞壁水解酶原生质体原生质体的固定化方法离心分离010302一般采用网格包埋法（即凝胶包埋法）。常用凝胶：琼脂凝胶，海藻酸钙凝胶，角叉菜胶和光交联树脂。注意：一般要加渗透压稳定剂，以防止原生质体破裂。原生质体固定化第二节?固定化酶和固定化细胞的性质与表征固定化酶的性质影响酶催化活性的因素构象改变或立体屏蔽扩散限制效应通常低于天然酶（有例外）。（一）酶的活性：酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加。（二）酶的稳定性可能的原因：固定化增加了酶活性构象的牢固程度，可防止酶分子伸展变形；抑制酶的自身降解。固定化部分阻挡了外界不利因素对酶的侵袭。010302（三）酶的最适温度最适温度与酶稳定性有关。多数酶固定化后热稳定性上升，最适温度也上升（有例外）。如：氨基酰化酶，70℃，15分钟，酶失去活性。而固定化后，70℃，15分钟，有80%活性。（四）酶的最适pH载体性质的影响带负电荷载体：最适pH向碱性偏移。