《流式细胞术概述》课件.ppt

流式细胞术概述：原理、应用与发展本课件将带领大家深入了解流式细胞术的原理、应用与发展趋势，并介绍流式细胞术在不同领域的应用案例。

课程目标与学习内容了解流式细胞术的基本原理掌握流式细胞仪的工作流程学习流式细胞术的应用案例熟悉流式细胞术在不同领域中的应用

什么是流式细胞术流式细胞术是一种利用激光束照射流过狭窄液流的单个细胞或微粒，通过检测散射光和荧光信号来分析细胞或微粒的物理和化学特征的技术。它能够快速、准确地对大量细胞进行多参数分析，并对目标细胞进行分选，在生物学、医学等领域具有广泛的应用。

流式细胞术的发展历史11949年，Coulter开发了第一个细胞计数仪21969年，LosAlamos国家实验室首次将激光用于细胞分析31972年，第一台商用流式细胞仪诞生41980年代，多色荧光分析技术逐渐成熟521世纪，流式细胞术与其他技术融合，发展出新一代流式细胞术

流式细胞仪的基本结构流体系统光学系统信号处理系统数据分析系统

流式细胞仪的工作原理流式细胞仪将细胞悬液注入仪器，细胞在鞘液的包裹下，逐个通过激光束照射区域。激光照射细胞后，会产生散射光和荧光信号，这些信号被光学系统收集并传递到信号处理系统，最终转化为数据并显示在计算机屏幕上。

流体系统详解流体系统是流式细胞仪的核心部分，负责将细胞悬液送入激光束照射区域，并控制细胞流速和聚焦。流体系统主要由样本系统、鞘液系统和液流通道组成，它们共同保证细胞能够以单细胞状态通过激光束照射区域，并获得精确的分析结果。

流式细胞仪的鞘液系统鞘液系统是一个关键的辅助系统，负责将鞘液包裹在细胞悬液周围，形成一个稳定的液流，保证细胞能够以单细胞状态通过激光束照射区域，并减少细胞之间的相互干扰。

流式细胞仪的样本系统样本系统负责将待测样本（细胞悬液）引入流式细胞仪，通常配备注射泵或其他装置控制样本流速，确保样本能够以稳定的速度进入液流通道，以便进行精确的分析。

层流原理与细胞聚焦鞘液系统利用层流原理，将鞘液包裹在细胞悬液周围，使细胞在液流中形成一个稳定的单细胞流，保证每个细胞都能被激光束照射。鞘液的压力和流速可以调节细胞聚焦的程度，确保每个细胞都能被激光束精确照射。

光学系统概述光学系统是流式细胞仪的关键组件，负责产生激光束，收集散射光和荧光信号，并传递到信号处理系统。光学系统主要包括激光器、光学滤光片、光电倍增管等部件。

激光器类型与选择1氩离子激光器波长488nm，适用于FITC、PE等常见荧光染料2红宝石激光器波长633nm，适用于一些红色荧光染料3二极管激光器可发出多种波长的激光，适用于多色荧光分析

光学滤光片系统光学滤光片系统用于过滤不同波长的光，将散射光和荧光信号分离，确保每个检测器只接收特定的信号，提高分析精度。常见的滤光片类型包括长通滤光片、短通滤光片和带通滤光片。

前向散射光原理前向散射光是指激光照射到细胞后，一部分光被细胞散射到与激光束方向相同的区域。前向散射光的大小与细胞的大小和形状有关，可以用来区分不同大小的细胞，例如，区分淋巴细胞和单核细胞。

侧向散射光原理侧向散射光是指激光照射到细胞后，一部分光被细胞散射到与激光束方向垂直的区域。侧向散射光的大小与细胞的颗粒度和复杂程度有关，可以用来区分不同类型的细胞，例如，区分淋巴细胞和红细胞。

荧光检测原理荧光检测原理是基于细胞中特定物质对激光照射后产生荧光信号。荧光信号的大小与细胞中特定物质的浓度有关，可以用来分析细胞中特定物质的含量，例如，检测细胞表面的抗原表达量。

常见荧光染料介绍流式细胞术中常用的荧光染料主要分为三种：FITC（异硫氰酸荧光素）、PE（藻红蛋白）和APC（别藻蓝蛋白）。每种荧光染料都具有特定的激发波长和发射波长，适用于不同的荧光检测通道。

FITC荧光染料特性FITC是一种常用的绿色荧光染料，激发波长为488nm，发射波长为525nm，广泛用于流式细胞术检测细胞表面的抗原或DNA含量。

PE荧光染料特性PE是一种红色荧光染料，激发波长为488nm，发射波长为575nm，与FITC在荧光谱上有所区别，可以用于多色荧光分析，检测细胞表面的不同抗原。

APC荧光染料特性APC是一种红色荧光染料，激发波长为633nm，发射波长为660nm，与FITC和PE在荧光谱上均有明显区别，可用于多色荧光分析，检测细胞表面的更多抗原。

多色荧光分析策略多色荧光分析是指使用多种荧光染料标记不同的细胞表面抗原或其他物质，并利用流式细胞仪同时检测这些荧光信号，从而获得更多细胞信息的分析技术。

补偿原理与方法补偿是指在多色荧光分析中，由于不同荧光染料的发射光谱可能存在重叠，需要对不同通道的信号进行补偿，以消除重叠部分的影响，确保每个荧光通道的信号准确反映其对应的物质含量。

信号处理系统信号处理系统负责接收光学系统传递过来的散射光和荧光信号