DB37T 2843-2016 鸭坦布苏病毒双抗体夹心ELISA检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T2843—2016

鸭坦布苏病毒双抗体夹心ELISA检测方法

DetectionmethodonDuckTembusuVirusbyadoubleantibodysandwichELISA

2016-09-18发布2016-10-18实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T2843—2016

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东农业大学。

本标准主要起草人：刁有祥、陈浩、唐熠、提金凤、冯强、欧全宾。

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DB37/T2843—2016

鸭坦布苏病毒双抗体夹心ELISA检测方法

1范围

本标准规定了鸭坦布苏病毒双抗体夹心ELISA方法的样品采集和保存、样品处理、试剂及仪器、检

测步骤、结果判定等。

本标准所规定的鸭坦布苏病毒双抗体夹心ELISA方法适用于检测鸭组织、分泌物、排泄物和鸭胚尿

囊液中的坦布苏病毒，也适用于鹅和其他动物坦布苏病毒的检测。

2试剂及仪器

2.1试剂

2.1.1捕获单抗，抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体。

2.1.2检测单抗，辣根过氧化物酶标记(HRP)的另一株抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体，简称酶标单

抗。

2.1.3阳性对照：坦布苏病毒鸭胚尿囊液。

2.1.4阴性对照：SPF鸭胚尿囊液。

2.1.5磷酸盐缓冲液(PBS),见A.1。

2.1.6包被液，见A.2。

2.1.7洗涤液，见A.3。

2.1.8样品稀释液、封闭液，见A.4。

2.1.9底物溶液，商品化TMB底物显色液。

2.1.10终止液，见A.5。

2.1.11甘油盐水，见A.6。

2.2仪器

2.2.1酶标仪。

2.2.2微量加样器。

2.2.3恒温培养箱。

2.2.4聚苯乙烯板。

2.2.5水平振荡器。

2.2.6生物安全柜。

3样品准备

3.1样品的采集和处理

3.1.1样品的采集

死亡鸭采集卵泡膜、脾和脑等组织样品，进行分别处理或同时处理；活鸭采集咽喉或泄殖腔拭子。

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3.1.2样品的保存

样品应放在含有抗生素的pH值7.0~7.4的等渗磷酸盐缓冲液内(无PBS可用25%～50%甘油盐水)。

抗生素的选择视当地情况而定，组织和咽喉拭子悬液中应含有青霉素(2000IU/mL)、链霉素(2mg/mL)、

庆大霉素(50μg/mL)和制霉菌素(1000IU/mL),加入抗生素后pH值应调至7.0~7.4。在室温放置1h~2

h内样品应尽快处理。不能尽快处理的可在4℃存放24h,也可于低温条件下保存(-70℃贮存最好)。

3.1.3样品的处理

样品的处理在生物安全柜中进行。喉头或泄殖腔拭子，置于200μL含有抗生素的pH值7.0~7.4等渗

磷酸盐缓冲液中；对组织样品取0.2g置于500μL含有抗生素的pH值7.0~7.4等渗磷酸盐缓冲液中