还原糖含量试剂盒测还原糖时分光光度计测的数据一直在跳动从0.9-1.9的波动范围，溶液在E，，管里面是澄清的，倒进比色皿就混浊了是什么原因？.docx

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还原糖含量试剂盒测还原糖时分光光度计测的数据一直在跳动从0.9-1.9的波动范围，溶液在E，，管里面是澄清的，倒进比色皿就混浊了是什么原因？

还原糖测定的基本原理。常见的方法如DNS法（3,5-二硝基水杨酸法），利用还原糖在碱性条件下加热与DNS反应生成红棕色氨基化合物，通过分光光度计在特定波长下测定吸光度。如果溶液在转移过程中变混浊，可能涉及到反应条件的变化或者溶液中存在其他干扰物质。分析如下：

温度问题：反应可能需要在特定温度下进行，比如沸水浴。如果E管中的溶液在加热后未冷却就转移到比色皿，可能导致温度变化引起溶液中的物质沉淀，从而变混浊。温度变化也可能影响吸光度的稳定性，导致数据波动。

pH值变化：还原糖反应通常需要在碱性条件下进行。如果比色皿或转移过程中引入了酸性物质，可能导致pH值下降，使反应产物分解或沉淀，导致混浊。同时，pH变化也会影响吸光度的准确性。

溶液混合不均匀：E管中的溶液可能在加热后未充分混合，导致转移到比色皿时局部浓度不均，产生混浊。此外，混合不充分可能导致反应不完全，吸光度不稳定。

比色皿污染：比色皿未清洗干净，残留的化学物质可能与溶液中的成分反应，导致混浊。需要检查比色皿的清洁度，使用前是否用蒸馏水冲洗并干燥。

样品本身的问题：如果样品中含有其他干扰物质，如蛋白质、多糖等，可能在反应条件下发生沉淀。例如，高浓度的蛋白质在碱性条件下可能变性沉淀，导致混浊。

反应时间不足：还原糖与DNS的反应需要一定的时间，如果反应时间不够，可能导致产物生成不完全，溶液不稳定，吸光度波动。

实验老师数据波动范围较大（0.9-1.9），这可能是由于溶液混浊导致光散射增加，吸光度不稳定。混浊的溶液会使实际吸光度高于真实值，并且由于颗粒的不均匀分布，每次测量时的散射情况不同，导致数据波动。

建议按照以下步骤：

1·重新进行反应：严格按照试剂盒说明书的步骤操作，确保反应温度、时间和pH值正确。

2·检查溶液状态：在转移前观察E管中的溶液是否完全澄清，如有混浊，可能需要重新处理样品或检查试剂。

3、过滤或离心样品：如果样品中含有悬浮颗粒，过滤或离心后再进行测定。

4·使用干净的比色皿：确保比色皿无残留杂质，必要时用乙醇或稀酸清洗。

5·稳定温度：在测量前让溶液冷却至室温，并保持比色皿和溶液温度一致。

6·检查仪器：使用标准溶液（如已知浓度的葡萄糖溶液）测试分光光度计的准确性和稳定性。

本文由莱贸生物科技（上海）有限公司提供