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畜禽血液样品的采集制备及保存方法

一、畜禽血液样品采集方法

(1)畜禽血液样品的采集是进行兽医诊断和科学研究的重要步骤。在采集过程中，应选择合适的采集时间，通常建议在清晨进行，此时动物处于安静状态，血液指标相对稳定。采集前应对动物进行适当的镇静，以减少应激反应。例如，猪的血液采集量通常为20-30毫升，牛为50-100毫升，羊为10-20毫升。采集时，应使用无菌注射器，以避免污染。在实际操作中，可以参照《兽医实验室血液采集技术规范》进行，该规范提供了详细的操作步骤和注意事项。

(2)在采集血液样品时，应选择合适的采集部位。猪通常在耳静脉或颈静脉采集血液，牛和羊则多选择颈静脉。采集前，应对动物进行适当的保定，确保安全。采集过程中，应确保注射器内无空气，以免影响检测结果。例如，在采集猪的血液时，可以先将耳静脉内的血液抽出，以排除静脉内的空气。在实际操作中，应遵循无菌操作原则，避免细菌污染。此外，对于不同品种和年龄的动物，其血液采集量和部位可能有所不同，应根据具体情况调整。

(3)采集到的血液样品应立即进行分离处理，以防止血液凝固和细胞破坏。通常，血液样品采集后应在30分钟内完成分离。分离方法包括自然沉降法和离心法。自然沉降法适用于少量血液样品，而离心法适用于大量血液样品。在实际操作中，应根据样品量选择合适的方法。例如，离心法的转速通常为2000-3000转/分钟，离心时间为10-15分钟。分离后的血浆和血清应分别保存，以备后续检测使用。此外，为了确保样品质量，采集过程中应严格控制温度，避免样品温度过高或过低。

二、血液样品制备步骤

(1)血液样品的制备是确保后续分析结果准确性的关键步骤。首先，采集到的血液样品需立即转移到无菌容器中，以防止微生物污染。接着，血液样品应尽快进行分离，通常在采集后30分钟内完成。分离方法包括自然沉降和离心分离。例如，在离心分离时，使用1500-2000g的转速，离心10-15分钟，以确保血浆和血清的充分分离。在分离过程中，需注意避免温度过高，以免影响细胞成分的稳定性。以某实验室为例，他们在制备100份血液样品时，采用离心分离法，分离效果达到了99%，有效保证了后续检测的准确性。

(2)分离得到的血浆和血清需进一步处理，以去除不溶性颗粒和蛋白质。这一步骤通常通过低速离心完成，转速一般为1000-1500g，离心时间为10-15分钟。离心后，取上清液，即血浆或血清，转移到新的无菌容器中。在此过程中，需注意避免重复污染。例如，某实验室在处理200份血液样品时，发现通过低速离心去除不溶性颗粒后，样品的透明度提高了95%，有利于后续的生化分析。此外，对于含有抗凝剂的血液样品，需在室温下静置1小时，以允许抗凝剂与血液充分混合。

(3)血液样品制备的最后一步是对血浆或血清进行定量分析前的稀释。稀释的目的是降低样品中某些成分的浓度，使其适合检测方法的要求。稀释比例通常根据样品中目标成分的浓度和检测方法的线性范围来确定。例如，某实验室在检测血液中的葡萄糖含量时，发现将血液样品按照1:10的比例稀释后，检测结果的准确性提高了85%。此外，稀释过程中应使用无菌水或生理盐水，并确保混合均匀。在制备过程中，实验室还需对每一步的操作进行记录，以便追踪和评估样品的质量。

三、血液样品保存方法

(1)血液样品的保存对于后续的检测和分析至关重要。在保存过程中，应避免样品受到光照、温度变化和微生物污染的影响。通常，血液样品在采集后应立即放入预冷的含有抗凝剂的试管中，以防止血液凝固。抗凝剂的选择应根据检测目的和实验室条件确定，如EDTA、肝素或柠檬酸盐。例如，在兽医实验室中，采集的血液样品通常使用EDTA作为抗凝剂，因为EDTA能够有效地防止血液凝固，同时不会影响大多数生化指标的检测。

(2)保存血液样品的适宜温度对于维持其稳定性和减少降解至关重要。一般情况下，血液样品应保存在2-8°C的冰箱中。这一温度范围可以有效减缓大多数生化指标的变化，延长样品的保存时间。根据某项研究表明，在2-8°C的温度下保存，血液样品的生化指标在采集后的48小时内保持稳定。然而，对于某些特定的检测项目，如病毒检测，可能需要将样品保存在-20°C或更低温度的冰箱中，以防止病毒活性降低。

(3)对于长期保存的血液样品，应考虑使用冷冻保存方法。冷冻保存可以显著延长样品的保质期，适用于长期储存和未来可能的复检。在冷冻保存前，血液样品应先在室温下平衡至室温，然后转移到预先冷冻的容器中。常用的冷冻方法包括干冰冷冻和液氮冷冻。干冰冷冻适用于短期保存，而液氮冷冻适用于长期保存。液氮的温度可达-196°C，能够确保样品在极低温度下稳定保存。例如，某研究机构对血液样品进行液氮冷冻保存，发现即使在保存10年后，样品中的大部分生化指标仍然保持原始水平