DB63_T 1693-2018 青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作规程.docx

ICS65.020.30B43

备案号：60857-2018

DB63

青海省地方标准

DB63/T1693—2018

青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作规程

2018-09-25发布2018-12-01实施

青海省质量技术监督局发布

I

DB63/T1693—2018

前言

本规程按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由青海省农牧厅提出并归口。

本标准起草单位：青海省家畜改良中心。

本标准起草人：莫延新、谢秀梅、冯宇诚、张晋青、补海平、袁海洲、王廷艳、杨玉芹、李梦怡、谭建宁、扈添琴、潘顺利、马元梅、胡宁玺、白坤云。

DB63/T1693—2018

1

青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作规程

1范围

本标准规定了青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作过程中供体羊的选择和饲养管理、超数排卵、准备工作、手术冲胚、胚胎质量鉴定、胚胎玻璃化冷冻、标记和贮存。

本规程适用于青海省高原型、山谷型、欧拉型藏羊冷冻胚胎制作。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

NY/T1674胚胎质量检测技术规程

DB63/T039青海藏羊

DB63/T547.1青海藏羊饲养管理技术规范

3术语及定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

供体羊

提供胚胎的羊个体。

3.2

超数排卵

利用生殖激素提高供体羊同期卵泡发育数量和卵子数量的技术。

3.3

冲胚

配种后第7d，用冲卵管等装置，把供体母羊子宫内的胚胎冲洗出来的过程。

3.4

检胚

对胚胎进行清洗、质量鉴定和分级的过程。

3.5

DB63/T1693—2018

2

超低温保存

胚胎放置在液氮中长期保存。

3.6

胚胎玻璃化冷冻

应用高浓度防冻剂，使胚胎内外液的同源晶核形成温度与玻璃态转化温度基本接近，控制防冻剂与胚胎的平衡时间和温度，使防冻剂对胚胎毒性降低到最低程度。胚胎内外液能迅速转化形成玻璃体，直接投入液氮中保存。

4种公羊的选择和饲养管理

4.1种公羊的选择

体型外貌评价、生长发育等指标符合DB63/T039要求，具有种用价值，体质健康无疫病。4.2种公羊的饲养管理

种公羊按照DB63/T547.1规定，补充优质蛋白质、维生素A、维生素E及无机盐等矿物质，做到科学饲喂，适当运动,保证中等膘情，在本交前不宜吃的过饱。

5供体羊的选择和饲养管理

5.1供体羊的选择

体型外貌评价、生长发育等指标符合DB63/T039要求，生殖机能正常，体质健康无疫病。

5.2供体羊的饲养管理

供体羊在采胚前后按照DB63/T547.1规定，对供体羊补充能量、蛋白质、维生素和矿物质，并供给充足清洁饮水，做到科学饲喂，保证中等膘情。

6超数排卵

6.1超数排卵时间

供体羊超数排卵开始处理时间，应在诱导发情的第9d进行。

6.2超数排卵性腺激素选择

促卵泡素（FSH）、促黄体素释放激素A3（促排3号）、氯前列烯醇（PG）、孕激素阴道栓塞（CIDR）。

6.3超数排卵处理方法

超数排卵方法：促卵泡素多次注射法（FSH多次注射法）。首先放置阴道栓塞，以放置阴道栓栓塞为发情周期第0d，从第9d开始，每天上、下午间隔12h采用逐渐减量的方法肌注促卵泡素（FSH），连续注射4d，注射第6针促卵泡素（FSH）时同时注射氯前列稀醇（PG）0.2mg，在注射第7针促卵泡素（FSH）时取出阴道栓。

DB63/T1693—2018

3

剂量:根据促卵泡素（FSH）药用剂量，依据供体母羊体重增减。

6.4发情鉴定及配种

在第12d下午注射最后一针促卵泡素（FSH）时，即对供体羊进行发情鉴定，用试情公羊进行试情，每20只供体母羊放1只试情公羊，以供体羊站立接受爬跨并完成本交过程为止，间隔8h~12h再配1次，连续配种2次~3次，同时，对供体羊每次配种结束后注射促黄体素释放激素A3（促排3号）20μg和维生素ADE3ml，做好标记与记录。

7确定冲胚时间

配种后的第7d从子宫回收胚胎。

8准备工作

8.1手术室要求

胚胎采集要在专门的手术室内进行，手术室要求洁净明亮，光线充足，面积宜大于15m2以便于操作。配备照明用电,室内温度保持在20℃~25℃,手术前用紫外灯照射1h~2h。

8.2供体羊准备

供体羊手术