鸡新城疫血凝和血凝抑制实验.pptVIP

鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价目的1、掌握鸡新城疫的临诊要点。2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。内容鸡新城疫的临诊要点。鸡新城疫的实验室诊断。NDV的分离及鉴定；NDV毒力的鉴定123鸡新城疫的免疫效果评价4鸡新城疫的免疫监测血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)HA和HI的原理01HA试验：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受体结02合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象?。03HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。04血凝试验（HA）和血凝抑制试验(HI)01【材料】02新城疫病毒鸡胚接种尿囊液1份035％鸡血球悬液1管04生理盐水或PBS1瓶0596孔微量血清盘1块06微量加样器1支一、鸡新城疫的血凝试验(HA)一、鸡新城疫的血凝试验(HA)【方法与步骤】（一）制备鸡红细胞悬液：1.用注射器抽取抗凝剂。?2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血。3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次（第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分5分钟）洗去血清及白细胞。⒋取纯红细胞0.6ml，加生理盐水稀释99.4ml，即成1%的鸡红细胞悬液。在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50?L生理盐水。A于左侧第1孔加50?L病毒液，混合均匀后，吸50?L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50?L；第12孔为红细胞对照。B自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50?L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果。C（二）加样一、鸡新城疫的血凝试验(HA)一、鸡新城疫的血凝试验(HA)【病毒血凝试验的操作方法（单位：?L）】?孔号123456789101112病毒稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048对照生理盐水505050505050505050505050病毒液50505050505050505050500.6%红细胞505050505050505050505050微型振荡器1min，静置30min弃50结果观察+++++++++++++++++++++++++++++++++--以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位【结果判定】置于振荡器上振荡1分钟，静置后30min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100%凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。?010302一、鸡新城疫的血凝试验(HA)二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)【材料】除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免疫血清。01取鸡蛋卵黄20ml，加入等量生理盐水，振荡，摇匀。03取振荡的卵黄液3000～4000rpm30分钟。02加入等量氯仿40ml，振荡30分钟。04取上清液作为抗体检测材料鸡群卵黄抗体的制备