《基因生物化学》课件.ppt

基因编辑生物化学：从基础到前沿基因编辑技术是近年来生物技术领域最具颠覆性的技术之一，它为人类了解生命奥秘、治疗疾病、改造生物提供了前所未有的强大工具。本课程将带领大家深入学习基因编辑的生物化学基础、工具及应用，从分子机制到实际操作，为深入理解基因编辑技术打下坚实基础。

课程概述与学习目标课程目标本课程旨在帮助学生掌握基因编辑的理论基础、技术原理、操作流程以及应用领域，培养学生独立开展基因编辑实验的能力，并能够理解基因编辑技术的伦理问题和未来发展趋势。学习目标深入了解基因编辑的分子机制掌握不同基因编辑工具的原理及操作掌握基因编辑实验设计及效率评估方法了解基因编辑在医学、农业、工业等领域的应用思考基因编辑技术的伦理问题和未来发展方向

基因编辑的历史发展11970s限制性内切酶的发现，为基因编辑奠定了基础。21980s重组DNA技术兴起，基因编辑技术开始起步。31990s锌指核酸酶（ZFNs）技术问世，开启了基因编辑的新时代。42000sTALENs技术发展，基因编辑工具更加精确高效。52010sCRISPR-Cas9系统横空出世，基因编辑进入快速发展阶段。62020s新型基因编辑工具不断涌现，基因编辑技术应用领域不断扩展。

DNA双螺旋结构与基因组DNA结构DNA是由脱氧核糖核酸组成的双螺旋结构，其中包含遗传信息，并通过碱基对（A-T、C-G）的配对方式进行复制和传递。基因组基因组是指一个生物体完整的遗传物质，包含全部的DNA序列，是生命活动的蓝图。基因编辑技术可以对基因组进行精准的修改，实现对生物性状的改变。

基因表达的基本原理转录DNA序列被转录成mRNA，这是基因表达的第一步。翻译mRNA被翻译成蛋白质，这是基因表达的第二步，也是最终执行遗传信息的步骤。

中心法则：DNA到RNA到蛋白质1蛋白质执行生物功能的分子机器2RNA中间传递遗传信息的分子3DNA储存遗传信息的分子

基因编辑的分子基础识别基因编辑工具需要精确识别目标DNA序列。切割基因编辑工具需要切割目标DNA序列，产生双链断裂。修复细胞利用DNA修复机制修复双链断裂，实现基因的修改。

DNA修复机制概述1同源重组修复（Homologousrecombinationrepair，HRR）2非同源末端连接（Non-homologousendjoining，NHEJ）3微同源介导末端连接（Microhomology-mediatedendjoining，MMEJ）

同源重组修复同源重组修复利用同源染色体或姐妹染色单体上的序列作为模板，精确修复DNA双链断裂。这种修复方式具有高度的精确性，可以确保断裂部位的序列完整无误。

非同源末端连接非同源末端连接是一种快速、粗糙的修复方式，不需要同源模板，而是直接将断裂的DNA末端连接起来。这种修复方式可能会导致序列丢失或插入，从而造成基因突变。

基因编辑工具的演变1限制性内切酶早期的基因编辑工具，只能识别特定的DNA序列进行切割。2锌指核酸酶ZFNs可以识别更长的DNA序列，并进行精准的切割。3TALENsTALENs具有更高的识别效率和灵活度，可以靶向更广泛的基因序列。4CRISPR-Cas9系统CRISPR-Cas9系统操作简单、成本低廉，成为目前应用最广泛的基因编辑工具。

限制性内切酶的发现限制性内切酶是细菌用来抵御外来DNA入侵的酶，它们可以识别特定的DNA序列并将其切割。限制性内切酶的发现，为基因编辑技术的诞生奠定了基础，因为它们可以用来切割基因组中的特定片段。

锌指核酸酶（ZFNs）原理锌指核酸酶（ZFNs）是一种人工设计的蛋白，它由两个部分组成：锌指结构域和核酸酶结构域。锌指结构域可以识别特定的DNA序列，而核酸酶结构域可以切割DNA双链。ZFNs可以靶向特定的基因序列，并将其切割，从而实现基因编辑。

ZFNs的结构特征ZFNs的锌指结构域是由多个锌指模块组成的，每个模块可以识别3个碱基。通过组合不同的锌指模块，可以设计识别任何DNA序列的ZFNs。核酸酶结构域通常来自FokI核酸酶，它可以切割双链DNA。

ZFNs的应用实例ZFNs已被用于治疗遗传疾病，例如镰刀型细胞贫血和杜氏肌营养不良症。ZFNs也可以用来生成基因敲除动物模型，用于研究基因功能。

TALENs技术简介TALENs是另一种人工设计的基因编辑工具，它也是由两个部分组成：TAL效应蛋白结构域和核酸酶结构域。TAL效应蛋白可以识别单个碱基，通过组合不同的TAL效应蛋白模块，可以设计识别任何DNA序列的TALENs。

TALENs的分子机制TALENs的TAL效应蛋白结构域由多个重复单元组成，每个单元可以识别单个碱基。每个重复单元的第12和13位氨基酸决定了它识别的碱基。核酸酶结构域通常来自FokI核酸酶，它可以切割双链DNA。

TALENs的优势