遗传性疾病的分子诊断.pptVIP

d)熔点曲线分析(meltingcurveanalysis）DNA片段中突变碱基与正常碱基不能配对而形成异源双链，所产生的Tm较完全配对的同源双链的Tm低，在仪器上显示出不同的曲线从而将突变序列检测出来。所需仪器如高效液相色谱仪(DHPLC)、WAVEDNA片段分析系统、LightCycler等。e)双脱氧指纹图谱（dideoxy

fingerprinting，ddF）是将SSCP和Sanger双脱氧测序法结合起来的一种突变检测方法。将PCR产物纯化后用与2条双链各自互补的两个引物分别做sanger测序反应，但不同的是仅加入一种双脱氧核苷，反应产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据突变性质电泳图谱上会显示丢失或获得一条带或者至少有一条带的迁移率会发生改变。f.DNA序列分析（DNAsequencing）Sanger测序技术：以待测序列的单链DNA作为模板，加入一个引物和dNTP作为底物，并加入一定比例的2’，3’-ddNTP，在DNA聚合酶的作用过程中，正常dNTP的掺入使链延伸，若ddNTP的掺入则使链终止，这样就可以得到一系列长度不同的以四种ddNTP结尾的DNA片段，经电泳后可直接读出碱基序列。g)蛋白截短测试验

（proteintruncationtest，PTT）从蛋白质水平检测由于碱基突变导致终止密码产生而使蛋白质合成提前终止产生截短的蛋白质。将正常人和病人的RNA逆转录成cDNA，并以cDNA作为模板进行PCR反应，扩增产物在体外经过转录，在无细胞提取液中能被翻译而合成蛋白质。所合成的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测时会出现比正常蛋白质截短的蛋白质。PCR技术Southern印迹技术3.动态突变的检测4.基因表达异常的检测定量PCR技术#2022（二）间接诊断所采用的技术1.双等位基因多态性限制性片段长度多态性（RFLP）第一代DNA的遗传标记，具双等位基因（bi-allele）多态性，所含信息量有限。检测方法：Southern印迹技术2.多等位基因多态性小卫星序列又称串联重复可变数目（variablenumbertandemrepeats，VNTR),第二代DNA的遗传标记，以6~70bp为单位，可重复数次至数十次，以串联形式排列，构成数量可变的串联重复序列。等位基因常常达10个以上，信息量比RFLP大得多。检测方法：Southern印迹或PCR技术遗传性疾病的分子诊断上海第二医科大学附属瑞金医院樊绮诗——诊断策略和工具用分子生物学技术通过检测基因而达到诊断疾病的目的是生物学者在分子生物学技术发展的最初阶段就有的设想。1976年人们开始在实验室进行研究，1984年以来，基因检测在许多国家已成为常规项目，主要用于遗传性疾病的诊断。一、遗传性疾病的分类01常染色体连锁遗传性疾病——致病基因位于常染色体02性染色体连锁遗传性疾病——致病基因位于性染色体常染色体连锁遗传性疾病常染色体隐性遗传——位于一对常染色体上的两个等位基因均发生突变才能产生临床症状，此时所导致的相应疾病即为常染色体连锁隐性遗传性疾病。同一对染色体中只有一个等位基因发生突变的个体称为杂合子，二个等位基因均发生突变的个体称为纯合子。囊性纤维变：常染色体连锁隐性遗传(7q31)常染色体连锁显性遗传——位于一对常染色体上的二个等位基因之一发生突变即产生临床症状，所导致的相应疾病即为常染色体连锁显性遗传性疾病。特点：家系中患者数目较多，大多情况下每一代均有患者。Huntington舞蹈症：常染色体显性遗传(4p16.3)性染色体连锁遗传性疾病X染色体连锁遗传：大多为隐性(如甲型血友病、杜氏肌营养不良症)，显性遗传非常罕见。Y染色体连锁遗传二、遗传性疾病中常见的分子异常遗传性疾病的产生是由于一个（或数个）基因发生异常导致这些基因所载有的遗传信息受到改变，而发病是通过遗传物质的表达产物——蛋白质（或酶）的表现异常所致。基因突变主要包括三大类，即点突变、片段性突变和动态性突变。（一）点突变点突变：DNA分子中单个碱基的替换终止密码子突变：点突变导致提前产生终止密码，或终止密码突变而编码一个氨基酸使肽链延长。错义突变、无义突变、移码突变各种点突变所造成的后果：蛋白质分子量改变、蛋白质合成量下降、无蛋白质合成。（二）片段性突变核苷酸的丢失和增多单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅地阐述观点。缺失：基因中硷基（遗传物质）的丢失单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅地阐述观点。插入：外来基因片段插入某一基因序列中单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅地阐述观点。倍增：