《液相色谱法及应用》课件.pptVIP

液相色谱法及应用本课程将带领大家深入了解液相色谱法的基本原理、仪器构造、操作方法以及在药物分析、环境监测、食品安全和生物样品分析等领域的应用，并探讨方法验证和仪器维护等重要内容。

课程学习目标掌握液相色谱法的基本原理和分类熟悉高效液相色谱仪的构造和操作了解色谱方法的开发、优化和验证学习液相色谱法在不同领域的应用案例

液相色谱法的发展历史11900年俄国植物学家茨维特首次成功地利用色谱法分离植物叶绿素21930年色谱法应用于药物分析，标志着色谱法在分析化学领域取得了重大进展31950年气相色谱法诞生，为色谱技术的应用提供了新的发展方向41970年高效液相色谱法问世，极大地提高了色谱分离效率和灵敏度5至今液相色谱法不断发展，并与其他分析技术相结合，应用范围不断扩大

液相色谱法的基本原理流动相流动相是一种液体，它在色谱柱中流动，将样品带入色谱柱固定相固定相是一种固体或液体，它被固定在色谱柱中，对样品进行分离样品样品是指需要进行分离的物质，它被注入色谱柱，并被流动相携带分离样品中不同组分在固定相上的保留时间不同，从而实现分离

分配色谱的基本概念分配系数分配系数是指样品在固定相和流动相中的浓度比，它反映了样品在固定相上的亲和力保留时间保留时间是指样品从进样到检测器的时间，它与样品在固定相上的保留系数有关洗脱体积洗脱体积是指样品从进样到最大浓度峰出现的时间，它与样品在固定相上的保留系数和流动相的体积有关

液相色谱法的分类1234正相色谱固定相为极性，流动相为非极性反相色谱固定相为非极性，流动相为极性离子交换色谱固定相带有离子基团，用于分离带电荷的样品凝胶色谱固定相为多孔材料，用于分离不同大小的分子

正相色谱的特点固定相为极性，如硅胶、氧化铝等流动相为非极性，如己烷、二氯甲烷等适用于分离极性物质，如糖类、氨基酸等分离效果受流动相的极性影响较大

反相色谱的特点固定相为非极性，如C18、C8等流动相为极性，如水、甲醇、乙腈等适用于分离非极性物质，如药物、脂类等分离效果受流动相的极性、pH值和有机改性剂的影响

离子交换色谱的原理1离子交换样品中带电荷的离子与固定相上的离子发生交换2分离不同离子与固定相的亲和力不同，导致分离3洗脱使用适当的洗脱液洗脱，将样品分离

凝胶色谱的应用范围分离蛋白质、多糖、核酸等生物大分子测定蛋白质的分子量分离和纯化药物、食品添加剂等分析环境污染物

高效液相色谱仪的构造溶剂输送系统提供稳定的流动相压力进样系统将样品准确地注入色谱柱色谱柱固定相所在的区域，进行分离检测器检测样品中各组分的浓度数据处理系统采集、处理和分析色谱数据

溶剂输送系统的组成溶剂瓶存放流动相脱气装置去除流动相中的溶解气体恒流泵提供恒定的流动相流速梯度洗脱系统改变流动相组成，提高分离效果

恒流泵的工作原理活塞运动活塞在泵体内往复运动，推动流动相通过色谱柱压力控制恒流泵通过压力传感器控制压力，保证流动相流速稳定流量控制恒流泵通过流量计控制流动相的流速，保证分离效果

进样系统的类型手动进样自动进样

自动进样器的优势提高进样精度和准确性节省人力和时间便于无人值守操作提高分析效率

色谱柱的选择1固定相选择合适的固定相，以匹配样品的性质2柱长较长的柱子可以提高分离效率，但会导致分析时间延长3内径较小的内径可以提高灵敏度，但会导致流动相消耗增加4颗粒大小较小的颗粒可以提高分离效率，但会导致流动相压力增加

固定相的种类硅胶正相色谱常用的固定相，具有良好的稳定性和分离性能氧化铝正相色谱常用的固定相，适用于分离极性物质C18反相色谱常用的固定相，适用于分离非极性物质C8反相色谱常用的固定相，分离性能与C18类似

流动相的选择原则与固定相相匹配对样品有良好的溶解能力具有良好的化学稳定性和光学性质对检测器无干扰能够提供最佳的分离效果

流动相的配制方法溶解将所需试剂溶解在纯水中，并进行过滤脱气使用脱气装置去除流动相中的溶解气体混合根据需要，将不同的流动相混合在一起过滤使用滤膜对流动相进行过滤，去除微粒

检测器的分类紫外-可见检测器根据物质对紫外-可见光的吸收进行检测1荧光检测器根据物质的荧光特性进行检测2示差折光检测器根据物质的折光率差异进行检测3电化学检测器根据物质的电化学性质进行检测4质谱检测器根据物质的质荷比进行检测5

紫外-可见检测器1原理利用物质对特定波长的紫外-可见光的吸收进行检测2特点灵敏度高，应用广泛3应用适用于检测具有紫外-可见吸收的物质

荧光检测器的特点灵敏度高，适合检测痕量物质选择性好，可用于复杂基质中特定物质的检测适用于检测具有荧光特性的物质

示差折光检测器适用于检测所有具有折光率差异的物质灵敏度较低，但通用性强适用于检测无紫外吸收或荧光特性的物质

电化学检测器1灵敏度高灵敏度，适合检测痕量物质2选择性选择性强，适用于检测电活性物质3应用适用于检测药物、环