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TA97TA98TA100TA102TA97TA98TA100TA102无组氨酸有组氨酸03040201组氨酸缺陷性鉴定TA97TA98TA100TA10201结晶紫染色02沾有结晶紫的滤纸片03脂多糖屏障缺陷鉴定1沾有青霉素滤纸片32青霉素TA97TA98TA100TA102R因子鉴定010203TA98TA102四环素沾有四环素滤纸片四环素鉴定TA97TA98TA100TA1020102紫外线照射8s0333cmuvrB突变鉴定01底层培养基02顶层培养基+菌液03每个菌株做两个平行皿自发回复突变鉴定菌株自发回复图变数TA9790~180TA9830~50TA100100~200YA102240~320平板渗入试验试验前准备样品剂量设定平板分组阴性阴性阴性阴性阳性阳性阳性阳性样品样品样品样品TA97TA98TA100TA102阴性阳性样品TA97平板分组底层培养基每支试管试验倒置培养48h后,计算每皿菌落数。01阴性对照组回变菌落数应在预期范围内,阳性对照组回变菌落数应至少为预期范围的3倍。否则对不在范围内的菌株应重新试验。02试验样品组变异频率比阴性对照至少增加两倍(即回变菌落数≥2×阴性对照数)即为阳性反应。03只要有一个试验菌株,无论在加S9或未加S9条件下为阳性,均可报告该受试物对鼠伤寒沙门氏菌为致突变阳性04结论判断体外哺乳动物细胞染色体畸变试验哺乳动物细胞染色体畸变和基因突变的替代试验:小鼠淋巴瘤细胞基因突变实验。替代原因:*试验项目一般为企业规定*Ames试验比较快速、简便、敏感、经济,且适用于测试混合物*用遗传学方法培植一种不能自行制造组氨酸的鼠伤寒沙门氏菌的变异体,这种菌株在无组氨酸的培养基中不能生长。如果将这种菌株与化学致癌物一起培养,则可使其DNA再次突变,恢复到能制造组氨酸的原型(野生型),即在无组氨酸的培养基中也能生长。利用这一特征性变化来测试化学物质有无致突变作用,并根据生长的菌落数目还可以判定其致癌性的强弱。*g=M×mol*周二上午配试剂,中午高压,下午倒平板,16个平板,从主平板中挑菌落,接种于营养肉汤培养基中,每个锥形瓶各5ml的培养基,于37℃,56rpm,到周三早上九点。摇菌时应用锡纸将锥形瓶包裹,然后在水浴摇床上加盖牛皮纸。*每组两个平行皿,48h观察*每组两个平行皿*每组两个平行皿*每组两个平行皿*每组两个平行皿,48h后观察。15w,距离33cm*在倒放烘干的底层培养基上,迅速倒入含0.1ml菌液的顶层培养基,混匀固化。*平板数112,每皿大约20ml,大约8瓶300ml的底层培养基。*在倒放烘干的底层培养基上,迅速倒入含0.1ml菌液的顶层培养基,混匀固化。*Ames试验比较快速、简便、敏感、经济,且适用于测试混合物*吉姆萨染料7.5g甲醇和甘油个500ml,用时,取1ml吉姆萨染液,再加10ml水*遗传毒性试验主要内容GBT16886.1-200101持久表面粘膜接触类02持久损伤表面接触类03持久血路接触类04长期组织/骨/牙接触05长期循环血液接触06长期植入类医疗器械071.遗传毒性试验01人工食道、接触眼镜、宫内节育器02创伤、愈合和保护用敷料(烫伤用敷料、硅橡胶纱布)2.遗传毒性试验涉及的医疗器械类样品3.遗传毒性试验内容遗传毒性-食品检测Ames试验Ames试验原理.........................
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