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一种皮肤刺激体外替代新方法

介绍一种皮肤刺激体外替代新方法

在医疗器械生物学评价方面，皮肤刺激试验目前仍采用家兔法进

行安全性试验，而运用减少（Reduction）、替代（Replacement）、

优化（Refinement）动物试验的3R原则和采用动物试验替代方法进

行安全评价，已成为欧洲社会努力实现的目标之一，皮肤刺激体外替

代新方法EpiSkinTM、改良EpiDermTMSIT和SkinEthicTMRHE

方法通过ECVAM（欧洲替代方法验证中心）大约10年时间的验证，

经历研究阶段→发展阶段→前期确认→确认阶段→多方专家独立回顾

→法规接受等阶段于2010年7月最终被OECDTG439采纳用来代替

家兔Draize法来进行皮肤刺激试验。下面就简要介绍一下皮肤刺激体

外替代新方法及其是如何被ECVAM验证的。

体外重组人皮肤表皮模型，是法国欧莱雅集团经过20年研究，从

一些乳房整形手术中获得表皮角化细胞(Keratinocytes)，在铺满胶原

质(collagen)培养器中培养两到三周，具有较强繁殖功能的角化细胞不

断分化、成层，最终成长为类似于人类表皮的皮肤组织。

图1正常人皮肤表皮结构图2体外重组人皮肤表皮结构

它具有原始皮肤细胞典型的器官结构和超微结构，可以像真实皮

肤一样不断生长，有皮肤屏障功能，在阳光下暴露一定的时间会变黑，

能表现一些人逐渐变老的特征，甚至还可以表现人愤怒时的迹象，非

常适合用于皮肤刺激体外替代试验，已经商品化的有EpiSkinTM、

EpiDermTMSIT和SkinEthicTMRHE

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图3EpiskinTM标准试剂盒

其试验原理是将受试物均匀涂布于皮肤模型上，接触一定时间后

用MTT法测试细胞存活率，若存活率≤50%提示有刺激性。

皮肤刺激替代方法的发展历程

1998-2001ECVAM对EpiSkinTM、EpiDermTM、Prediskin、

non-perfusedpigear

和SkinIntegrityFunctionTest(SIFT)的前期研究2002-2003对

EpiSkinTM、EpiDermTM和SIFT进行优化

2003-2007ECVAM对EpiSkinTM、EpiDermTM和SIFT进行

验证

2008ESAC声明改良EpiDermTMSIT和SkinEthicTMRHE方

法在欧盟DSD范围有效

2009ESAC声明EpiSkinTM、改良EpiDermTMSIT和SkinEthic

TMRHE方法可以在联合国全球化学品统一分类和标签制度GHS

和欧盟化学品分类、标签和包装法规CLP范围执行2009.7重组人

皮肤表皮方法作为欧盟试验方法B.46被接受2010.7OECD采纳了试

验指南TG439（体外皮肤刺激试验：重组人皮肤表皮试验方法）

ECVAM对优化的试验方法的验证

（1）第一阶段：优化草案和测试模型的确认（用20种编码的化

学物在顶尖实验室提前筛