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鱼类细胞工程基础实验课程安排动物细胞工程动物细胞工程，是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计，进行在细胞水平上的遗传操作,从而获得新型生物。动物细胞工程常用技术动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体技术胚胎移植技术细胞核移植技术细胞培养是指从动物活体中取出小块组织分离出细胞，在模拟机体内的生理环境条件下，进行培养，使之继续生存、生长、增殖。1原代培养2传代培养3永久细胞系4动物细胞培养鱼类病毒学：病毒的分离、鉴定以及病毒疫苗的制备水产基础理论鱼类免疫学鱼类遗传学鱼类细胞毒理学：评价样品的细胞毒性等0102030405细胞培养在水产业的应用BAC培养实验的思维，提高实验技能，锻炼动手能力。为将来适应多种领域的工作打基础。掌握无菌操作，养成规范的实验室工作习惯。本实验课的目的鱼类细胞培养的基本条件温度温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长。利用冷冻保藏细胞可保持细胞的原有分裂分化能力。温度过高导致细胞死亡。这主要是由酶和蛋白质所需要的最适温度决定的。适宜的温度：25℃(温带鱼)、30℃(热带鱼)、15℃(寒带鱼)、37℃(水生哺乳动物)。用NaHCO3和Hepes调节培养液的pH至7.4左右。2过酸或过碱可导致细胞死亡。这主要与蛋白质的变性和细胞膜的结构受损有关。1pH鱼类细胞培养的基本条件鱼类细胞培养的基本条件1渗透压2细胞膜调节渗透压的能力是有限的。需用平衡盐溶液配制各种试剂。3常用的平衡盐溶液：4PBS：磷酸盐缓冲溶液5（phosphatebufferedsolution）6D--Hanks营养物细胞培养基：培养基中含有细胞增殖和生长所需要的各种物质。常用培养基：MEM、M199、L-15等动物细胞离体培养常常需要血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。小牛血清；胎牛血清。鱼类细胞培养的基本条件支持物大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃或塑料培养瓶等作为支持物。气体交换CO2培养箱,调节CO2的比例为5%。去离子水/三次蒸馏水鱼类细胞培养的基本条件无菌条件体外细胞培养仅仅是对所需的细胞进行培养，但环境中（如空气）有各种其他微生物，必须对所需细胞进行无杂菌的隔离培养。无菌条件是细胞离体培养最基本的条件。鱼类细胞培养的基本条件超净工作台实验室仪器设备实验室条件：干燥、紫外灯仪器设备：高压灭菌锅:用于高压灭菌干燥箱:用于干燥超净工作台:用于无菌操作玻璃三蒸水器:用于制三蒸馏水恒温生化培养箱:用于恒温培养细胞倒置生物显微镜:用于观察细胞生长液氮罐：用于细胞长期保存实验报告（论文格式）目的与意义材料与方法实验结果讨论（问题\经验\体会）要求：多查阅参考文献，实验中胆大心细。考核方法010203无菌操作，严格规范操作；实验是连续性的，需要每天来观察和处理细胞；每天来做实验的时间与老师和研究生协商，各组时间要相对集中和固定。修读要求培养基过滤后需要加哪些物质？为什么？为什么胰蛋白酶和培养基要过滤灭菌，不能高压灭菌？生长培养基的pH值应为多少？呈什么颜色？为什么？为什么要培养基中需加入L-谷氨酰胺？为什么复苏细胞时，要迅速解冻？实验一二思考题STEP2STEP1每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体。在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。实验五染色体制备接种细胞：T75cm2瓶子1个换10mL新鲜medium和0.1mL秋水仙素（1μg/L）消化细胞，1000rpm离心，5分钟，收集沉淀细胞培养24h培养13-15h加2mLPBS混匀细胞将细胞悬液移到T75cm2的培养瓶内准备细胞操作步骤01慢慢加10mL双蒸水（4℃）02室温孵育10min03慢慢加10mL现配的GAA固定液（冰醋酸：甲醇＝1：3）04室温放置10min05移到一个离心管，1000rpm离心，10min06弃去上清，留约2mL07加3mL新鲜固定液，轻轻混匀细胞081000rpm离心，5min09弃去上清，留约0.5mL