DB32T 3451-2018 栽培稻种中杂草稻混杂检测规程.docxVIP

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2025-03-25 发布于山西
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DB32T 3451-2018 栽培稻种中杂草稻混杂检测规程.docx

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ICS65.020.20B22

备案号：DB32

江苏省地方标准

DB32/T3451—2018

栽培稻种中杂草稻检测规程

TestingregulationsofWeedyRiceinCultivatedRice’sSeed

2018-09-06发布2018-09-30实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T3451—2018

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4检测前准备工作 2

5操作步骤 2

6结果统计 3

附录A（规范性附录）普通PCR方法 6

DB32/T3451—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规则起草。本标准由南京农业大学提出并归口。

本标准起草单位：南京农业大学。

本标准主要起草人：强胜、戴伟民、宋小玲。

DB32/T3451—2018

栽培稻种中杂草稻检测规程

1范围

本标准规定了杂草稻的术语和定义、试剂配制、仪器和用具、照明要求、样品制备、操作步骤、结果计算等方面的内容。

本标准适用于栽培稻稻种中杂草稻的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T22505粮油检验感官检验环境照明

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

杂草稻weedyrice

杂草稻(weedyrice)是指在水稻田中可以自我繁衍具有杂草特性的水稻（OryzasativaL.）物种。3.2

纯合体的杂草稻homozygoticweedyrice栽培稻种子中具有红果皮的杂草稻。

3.3

杂合体的杂草稻heterozygousweedyrice

杂草稻的花粉飘逸到栽培稻柱头上发生杂交，产生的栽培稻种子（2n=24条染色体）中含有杂草稻的一半染色体（n=12条染色体），但果皮色依然表现为白色。称为杂草稻杂合体。其种植到田里开花结果，就会产生性状分离，产生具有红色果皮的杂草稻种子。

3.4

Rc基因Rcgene

Rc基因是水稻果皮原花色素积累途径中最重要的调节基因之一,位于第7染色体上,全长约6.4kb,包含有8个外显子,产物为一个具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)元件的调节蛋白。Rc基因具有比rc基因多14bp插入/缺失，从而设计特异性14bp插入/缺失引物进行PCR扩增，以检测杂合体杂草稻。

DB32/T3451—2018

4检测前准备工作

4.1试剂配制

聚丙烯酰胺母液（40%）：按19:1的比例将38g丙烯酰胺和2g甲叉双丙烯酰胺加入100ml去离子水中，待溶解后定容，于4℃冰箱中储存备用。5xTBE电泳缓冲液1L（母液）：54gTrisbase，27.5g硼酸，20ml0.5MEDTA（pH8.0），加蒸馏水至1L。10%过硫酸铵：1g过硫酸铵溶于10ml蒸馏水中，4℃冰箱中保存1周左右。400mLNaOH溶液：6g氢氧化钠，0.076g四硼酸钠，1.6ml甲醛(甲醛应放入冰箱中，易变性),加蒸馏水至400ml，现配现用。0.1%AgNO3：取0.1gAgNO3溶解于100ml蒸馏水中，现配现用。

4.2仪器和用具

稻谷检验出糙机、电动研磨机、PCR扩增仪、电泳槽、电泳仪、照相机。4.3照明要求

操作过程中照明条件应符合GB/T22505的要求。

4.4样品制备

纯合体杂草稻检测取样按GB5491-1985执行。上述纯合体杂草稻检测后，去除红色糙米，然后将白色糙米按GB5491-1985中3.1的规定混匀。将样品倒在光滑平坦的桌面上或玻璃板上，用两块分样板将样品摊成正方形，然后从样品左右两边铲起样品约10cm高，对准中心同时倒落，再换一个方向同样操作(中心点不变)，如此反复混合4次～5次，将样品摊成等厚的正方形。取