番茄SlGDSL和SlHMG1基因参与花柄脱落的机理分析.pdf

摘要

植物器官脱落是植物器官和母体脱离的自然现象，它与植物的发育、胁迫应

答以及农作物农艺性状的改良、驯化都是密切相关的。器官发生脱落的部位叫做

离区，离区的发育又涉及到了多种基因的参与，这个调控过程精细而复杂。发生

于离区的脱落过程涉及到了多个步骤，目前尚没有完善的脱落调控网络，并且前

期的研究多集中于转录因子功能的解析，对重要酶类的研究稍显不足。

番茄是研究离区发育和脱落过程的良好模式生物，前期，我们在对番茄花柄

离区发育的分子机理进行研究时发现，番茄MADS-Box基因家族中的J、SLMBP21

和MC会形成蛋白复合体来共同调控番茄离区的形成。在对无离区和有离区的花

柄进行转录组测序分析时发现，一个GDSL家族基因以及一个HMG1家族基因

可以同时被J、SLMBP21和MC正调控，并且在离区特异性表达，但这些成员

的生物学功能还未见报道。因此我们推测它们有可能会参与番茄花柄的脱落过程。

我们把番茄作为研究材料，从多个方面展开了研究，分析了番茄SlGDSL和

SlHMG1基因的功能，实验结果如下所示：

1.通过生物信息学手段进行了对两个家族基因的深入分析，我们确认了这

两个基因所编码蛋白的关键结构域，运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，我们设

计了针对这两个基因关键位点的gRNAs，成功构建了这两个基因的编辑载体，

通过对番茄进行转化，获得了这两个基因的编辑突变体，分别命名为slgdsl和

slhmg1，发现SlGDSL基因突变引起了番茄花柄自主脱落能力的降低，以及脱落

进程的延迟；而SlHMG1基因突变导致雄性不育，因此获得的转基因植株的数量

相对较少。根据以上实验结果，我们将后续的研究重点放在了SlGDSL基因上，

进一步探究其在花柄脱落过程中的作用机制。

2.接下来分析了SlGDSL基因在花柄自然脱落过程中的表达模式，通过实时

荧光定量PCR技术分析了SlGDSL基因在花柄不同组织以及不同时期表达量的

变化，发现开花之后该基因会一直特异表达于花柄的离区。为进一步明确SlGDSL

基因发挥作用的组织和位置，我们选取了SlGDSL基因ATG前3000bp序列，

对其启动区进行了预测并得到了三个核心启动区，启动子序列长为1480bp，并

利用了pCAM3301载体构建pSlGDSL::GUS启动子报告基因融合表达载体，以-

野生型番茄（MicroTom）为遗传背景，通过番茄转化来获得SlGDSL基因的启动

I

子分析转化植株。

3.最后对SlGDSL基因参与花柄脱落过程的机理展开了研究，首先构建了

SlGDSL-p1305亚细胞定位载体，在胞间质中检测到了GFP信号，说明SlGDSL

蛋白可能是在胞外发生作用的；接下来通过从脱落的第二阶段和第三阶段中选取

了三类标志性基因来分析SlGDSL基因会在花柄脱落过程的哪个阶段发挥作用，

通过基因表达变化分析得到，在花柄脱落过程中，这些标志基因在slgdsl突变体

和WT植株中的表达趋势是一致的，因此我们推测SlGDSL基因编码蛋白发挥作

用的时间节点可能是在脱落进程比较靠后的时候。

综上所述，经过研究我们成功地利用基因编辑技术获得了两个基因的突变体，

并发现了SlGDSL基因会参与并调控番茄花柄脱落过程，以及SlGDSL蛋白有可

能会在脱落的后期发挥作用，然而其具体调控机理仍需进一步深入探究。GDSL

家族蛋白具有多种功能，可能通过去乙酰化或角质聚合反应影响细胞壁或角质层

的代谢。未来的研究将集中在探究SlGDSL蛋白是否通过类似的功能影响脱落过

程，或者是否以其他方式参与调控。这项研究为我们拓展了番茄花柄脱落调控网

络，并为番茄的定向分子育种提供了更多功能基因信息。此外，对脱落过程中重

要酶类和代谢物的研究也有助于促进新型脱落调节剂的开发。

关键词：番茄；SlGDSL；SlHMG1；器官脱落；离区

II

目录

摘要I

ABSTRACTIII

第一章绪论1

1.1植物器官脱落1

1.1.1植物器官脱落概述1

1.1.2调节离区发育信号途径的多样性2

1.1