TWEBIO 0002-2024 人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR 检测方法.docx

ICS07.100.01

CCSC50

团 体 标 准

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人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测方法

Real-timefluorescentRT-PCRdetectionmethodforhumanrespiratorysyncytialvirus

2024-12-30发布 2024-12-30实施

武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会??发布

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目 次

前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

缩略语 1

生物安全要求 1

防污染要求 2

主要仪器 2

主要试剂 2

检测程序 2

结果判断 4

附录A（资料性） 操作流程示意图 6

I

II

II

1

1

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中国科学院武汉病毒研究所提出。

本文件由武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会归口。

本文件起草单位：中国科学院武汉病毒研究所、湖北省妇幼保健院、华中科技大学同济医学院附属协和医院、中华人民共和国广州海关技术中心、湖北省疾病预防控制中心。

本文件主要起草人：邓菲、杨娟、苏正元、付杰、白源、张丹娜、沈姝、唐霜、吴春晨、郑昕、师永霞、徐军强、李翔、殷强玲。

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人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测方法

范围

本文件规定了人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测的术语和定义、缩略语、生物安全要求、防污染要求、主要仪器、主要试剂、检测程序、结果判断。

本文件适用于临床样本咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物或呼吸道抽取物、深咳痰液、诱导痰液、支气管冲洗液、肺泡灌洗液和病毒培养物中的人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR的检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489 实验室生物安全通用要求

GB/T42066 急性病毒性感染呼吸道样本采集

WS/T230 临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用

WS/T442临床实验室生物安全指南

国卫科教发〔2023〕24号 人间传染的病原微生物目录

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

人呼吸道合胞病毒humanrespiratorysyncytialvirus，HRSV

一种含有包膜的RNA病毒，属肺炎病毒科（Pneumoviridae）人正肺病毒属（Humanorthopneumovirus）。

实时荧光聚合酶链反应real-timefluorescencepolymerasechainreaction，real-timePCR

在PCR反应体系中引入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，通过连续监测绘

制反应动力曲线，从而对样本中被扩增模板DNA的初始含量进行计算。该技术包含定性和定量检测，本标准为定性检测。

反转录reversetranscription，RT

以RNA单链为模板，在反转录酶催化下合成互补DNA（即cDNA）的过程。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

HRSV：人呼吸道合胞病毒（Humanrespiratorysyncytialvirus）PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

RT-PCR：逆转录聚合酶链反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction）RNA：核糖核酸（Ribonucleicacid）

FAM：6-羧基荧光素（6-carboxyfiuorescein）Ct值：循环阈值（Cyclethreshold）

ddH2O：双蒸水（Doubledistilledwater）

BSL-1：生物安全一级实验室（Bio-SafetyLevel1）BSL-2：生物安全二级实验室（Bio-SafetyLevel2）

生物安全要求

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根据《人间传染的病原微生物目录》规定，人呼吸道合