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摘要

过表达RB1CC1对小鼠脊髓损伤修复的影响

摘要

脊髓损伤(SpinalCordInjury,SCI)是一种脊髓实质因创伤或各种疾病而受

损，导致损伤水平以下的感觉、运动和自主神经系统瘫痪的疾病，SCI发病率高、

成本高、致残率高、发病年龄低，目前尚无有效治疗方法。在脊髓损伤急性期（≤

7天）大量神经元死亡及胶质瘢痕的形成导致SCI后运动功能障碍的主要原因，

因此脊髓损伤急性期是SCI治疗干预的重要窗口期，但我们目前对这一关键时期

发生的分子及细胞途径的理解有限。课题组前期研究发现RB1CC1在小鼠脊髓

RB1CC1RB1CC1

损伤后表达急剧降低，是自噬体生物合成起始阶段的关键因子，

表达下调可能暗示小鼠脊髓损伤后自噬失调。自噬是细胞高度保守的主动降解途

径，在维持细胞内环境的稳态、细胞的增殖生长和应激感染过程中起到非常重要

的作用。然而自噬在SCI病理生理过程中起着非常复杂的作用，调控自噬是促进

或抑制SCI后神经功能恢复尚存在争议，为进一步明确自噬在SCI的作用及

RB1CC1是否通过调控自噬发挥神经保护作用，本文构建了过表达小鼠RB1CC1

SCISCI24

基因重组腺病毒载体，注射至小鼠脊髓损伤部位，分别在后天，天、

8天收集小鼠脊髓组织，采用QRT-PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色研究了

小鼠脊髓损伤早期RB1CC1、自噬相关基因LC3B、Beclin1、p62，细胞凋亡相

Caspases3Bcl-2BimPERK-eIF2α-ATF4

关基因、、，以及调控细胞凋亡的通路中

的基因表达，采用动物行为学评分、HE染色法、免疫荧光染色评估了各时间点

小鼠脊髓损伤、神经元死亡、运动功能修复程度，研究结果如下：

1.成功构建了过表达RB1CC1腺病毒载体，首先PCR扩增目的基因片段；

然后用限制性酶切法切割GV742腺病毒载体，回收后和扩增的目的基因进行重

组反应，实现体外环化。最后用重组穿梭质粒和辅助质粒共同转染HEK293细胞，

并进行腺病毒的扩增以及浓缩纯化。

2.装载RB1CC1序列腺病毒构建成功后，注射至SCI模型小鼠损伤部位，荧

光检测发现，SCI后2天、4天均能在损伤中心及附近组织观察到强烈绿色荧光

GFPSCI8SCI

蛋白（）表达，天，绿色荧光减弱；后注射空载病毒的对照组

(-RB1CC1)小鼠脊髓内RB1CC1表达先降低后升高，各时间点均显著低于Sham

组，注射过表达腺病毒的实验组(+RB1CC1)小鼠脊髓内的RB1CC1表达趋势与对

(-RB1CC1)SCI8

照组一致，但在各时间点荧光强度均显著高于对照组，天

+RB1CC1组荧光强度最高，是-RB1CC1组小鼠1.9倍，荧光表达量几乎与Sham

I

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组一致。结果表明体内腺病毒侵染成功。

3.BMS评分结果显示+RB1CC1组小鼠在SCI术后4天、8天运动功能显著

SCI8GFAPmRNA-RB1CC1HE

改善，术后天基因的表达水平显著低