DB36_T 1902-2023 实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法.docx

ICS65.020.30

CCSB44

DB36

江西省地方标准

DB36/T1902—2023

实验动物嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR

检测方法

Laboratoryanimal—real-timequantitativePCRmethodforexaminationofpasturellapneumotropica

2023-12-11发布2024-06-01实施

江西省市场监督管理局发布

I

DB36/T1902—2023

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 2

5设备和材料 2

6试剂 2

7检测流程 2

8结果判定 4

附录A（规范性附录）溶液配制方法 5

附录B（规范性附录）荧光定量PCR的引物与探针 7

附录C（规范性附录）荧光定量PCR检测方法 8

参考文献 9

II

DB36/T1902—2023

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江西省卫生健康委员会提出并归口。

本文件起草单位：江西省职业病防治研究院。

本文件主要起草人：熊莉娟、周银平、张陆兵、肖芳平、万筱荣、贾菠、刘欢、罗勇兵、李建昌、周剑。

DB36/T1902—2023

1

实验动物嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法

1范围

本文件规定了实验动物嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测的术语和定义、缩略语、设备和材料、试剂、检测流程和结果判定等内容。

本文件适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔中嗜肺巴斯德杆菌的检测，饲养环境中嗜肺巴斯德杆菌的检测参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB14922实验动物微生物、寄生虫学等级及监测

GB/T14926.12实验动物嗜肺巴斯德杆菌检测方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

GB/T39760实验动物安乐死指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

嗜肺巴斯德杆菌pasturellapneumotropica

属于巴斯德菌科，巴斯德菌属，为革兰阴性，无动力，无芽孢的小杆菌。主要有两种生物型，分别是Jawetz型和Heyl型。

3.2

荧光定量聚合酶链式反应real-timequantitativepolymerasechainreaction;real-timePCR

在常规PCR的基础上，在反应体系中加入一对特异性引物和一条特异性探针，探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5→3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，淬灭作用消失，荧光信号产生并被检测仪器接受。随着PCR反应的循环进行，PCR产物与荧光信号的增长呈对应关系，通过检测荧光信号对核酸模板进行检测。

3.3

DB36/T1902—2023

2

Ct值cyclethresholdvalue

荧光定量PCR反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

PBS:磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline)

Taq酶:TaqDNA聚合酶(TaqDNApolymerase)

5设备和材料

5.1设备

设备包括但不限于：高压灭菌锅、荧光定量PCR仪、高速冷冻离心机、普通离心机、恒温孵育器、漩涡振荡器、组织匀浆器、生物安全柜、超净工作台、冰箱（4℃、-20℃、-80℃)、微量移液器（0.2μL~2μL、2μL~20μL、20