土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

实验操作制备培养基：制备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基可作为对照，判断选择培养基是否起到了选择作用。将菌液稀释103～107倍。每个稀释度下需要3个选择培养基，一个牛肉膏蛋白胨培养基。因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。准备8支灭菌的试管和1支灭菌的移液管。实验操作01样品稀释：将10g土样加入盛有90ml无菌生理盐水的锥形瓶中，充分摇匀，吸取上清液1ml，转移至盛有9ml生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度。02按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1ml菌液涂布平板，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，然后将平板置于30℃培养箱内培养2d。每隔24h比较一次牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红指示剂的培养基的斜面上，观察能否产生颜色反应。实验操作（4）微生物的培养与观察做好标记：本实验使用的平板和试管比较多。为避免混淆，最好在使用前就做好标记。例如，在标记培养皿时，应注明培养基种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度等。01在进行系列稀释的时候，为避免试管相互混淆，可以将已经进行过稀释操作的试管，按稀释度递增的顺序，依次放置在试管架的另一行。这样，试管的位置就能清楚地表示出稀释进行到哪一步。02注意事项：实验操作细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。结果分析与评价1、培养物中是否有杂菌污染对照的培养皿中无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染。反之，则被杂菌污染。结果分析与评价2、选择培养基是否筛选出菌落牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。结果分析与评价3、样品的稀释操作是否成功如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。结果分析与评价如果不同同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要分析产生差异的原因。4、重复组的结果是否一致实验的具体操作01从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。03.制备培养基：05.土壤取样02取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。04制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。06应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行样品的稀释㈣.取样涂布实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。㈣.取样涂布◆分离不同的微生物采用不同的稀释度稀释倍数目的细菌104、105、106保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板放线菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同㈤.微生物的培养与观察思考：要将哪些培养皿进行培养？01在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。02培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：30～37℃培养1～2d放线菌：25～28℃培养5～7d霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。㈤.微生物的培养与观察如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。之后讲课本P22的最上面内容讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容讲完后讲P23楷体字部分课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题背景细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。01课题的目的--土壤中分解尿素的细菌的分离与计数02从土壤中分离出能够分解尿素的细菌03统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌.统计菌落数目.筛选菌株.设置对照一.研究思路㈠.筛选菌株1、实例：DNA多聚酶链式反应(PCR技术)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。提出的问题—如何寻找耐高温的酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境；启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高