动物疫病鉴别检测技术 第3部分：禽腺病毒Ⅰ群与禽腺病毒Ⅲ群 DB37 T 4754.3—2024.pdf

ICS11.220

CCSB41

37

山东省地方标准

DB37/T4754.3—2024

动物疫病鉴别检测技术第3部分：禽腺病

毒Ⅰ群与禽腺病毒Ⅲ群

Animaldiseaseidentificationanddetectiontechnology—Part3:GroupIAvian

adenovirusesandGroupIIIAvianadenoviruses

2024-12-30发布2025-01-30实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4754.3—2024

动物疫病鉴别检测技术第3部分：禽腺病毒Ⅰ群与禽腺病毒Ⅲ群

1范围

本文件描述了禽腺病毒Ⅰ群与Ⅲ群聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction，PCR）的鉴别检

测方法。

本文件适用于含有禽腺病毒Ⅰ群与Ⅲ群的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试验原理

PCR技术是在TaqDNA聚合酶作用下，以靶DNA为模板、靶DNA序列5端与3端互补的且长度一般为

18bp～27bp的特异性寡核苷酸为引物、dNTP为反应原料，按照碱基配对及半保留复制原理，经变性、

退火、延伸循环多次，DNA扩增产物呈指数型上升，并通过琼脂凝胶电泳获知扩增产物的分子量从而判

定结果。本文件对禽腺病毒Ⅰ群与Ⅲ群靶基因进行PCR扩增，并通过特异性扩增产物分子量差异，用于

禽腺病毒Ⅰ群与Ⅲ群的鉴别检测。

5试剂或材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯。

水：GB/T6682，一级。

10000×核酸荧光染料（GelRed/GelGreen）。

DL2000DNA分子标准：包括100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp分子量标准。

PCR反应试剂：10×TaqDNA聚合酶缓冲液、TaqDNA聚合酶（5U/µL）、dNTP（2.5mmol/L）；2

×PCR反应预混液（2×TaqPCRMix）。

磷酸盐缓冲液（PBS）：0.01mol/L、pH7.4。

称取氯化钠（NaCl）8.0g、氯化钾（KCl）0.2g、磷酸二氢钾（KHPO）0.2g、磷酸氢二钠（NaHPO

2424

･12HO）2.9g，依次溶于800mL水中，用盐酸调pH值至7.4，于高压灭菌锅121℃灭菌20min，4℃保存。

2

0.5mol/LEDTA溶液：pH8.0。

1

DB37/T4754.3—2024

称取EDTA18.61g，加灭菌水至80mL，用氢氧化钠调pH至8.0，充分溶解，定容至100mL，室温保

存。

1×TA