实验血红蛋白及其衍生物的吸收光谱及.pptVIP

实验二血红蛋白

及其衍生物的吸收光谱测定掌握722型分光光度计的使用了解血红蛋白及其衍生物的吸收光谱的测定掌握血红蛋白标准曲线的绘制目的要求实验原理分光光度计的使用溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的，各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理---朗伯-比耳定律ε：摩尔吸光系数1c：溶液的浓度2l：液层的厚度3A：物质的吸光度4朗伯比尔定律：A=εlc手持毛玻璃面，不可触碰光滑面使用前要再用少量（大约1-2ml）待测溶液润洗1次使用时比色皿光滑面对准光路使用后及时清洗（用海绵刷沾取肥皂液清洗比色皿，并用自来水冲洗干净，随后用蒸馏水润洗1-2次）比色皿的使用血红蛋白(Hb)与O2结合生成氧合血红蛋白(HbO2)，与CO结合生成碳氧血红蛋白(HbCO)。因其血红蛋白分子结构不同，当光线分别透过各种Hb溶液时，所吸收的光波也各异，可显出特有的吸收光谱。这些吸收光谱可作为它们定性和定量分析的基础。12血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定如HbO2在可见光波长400~600nm范围内有3个特征的吸收峰，其峰值分别在415、541和576nm处，当氧合血红蛋白转为碳氧血红蛋白（HbCO），此时光谱发生改变，在波长419、540和569nm处出现三个特征的吸收峰，其中在500~600nm范围内2个特征的吸收峰如下图。项目吸收峰数吸收光谱（nm）HbO22541577HbCO2540569单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。为了能让您有更直观的字数感受，并进一步方便使用，我们设置了文本的最大限度，当您输入的文字到这里时，已濒临页面容纳内容的上限，若还有更多内容，请酌情缩小字号，但我们不建议您的文本字号小于14磅，请您务必注意。单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。仪器：试管；吸量管；量筒；722型分光光度计；CO发生器。试剂：

浓H2SO4；甲酸；蒸馏水；

血红蛋白溶液。NaOH；仪器和试剂关机01分光光度计的使用预热仪器选定波长调节T=100％调节“0”点测定02实验操作用草酸钾抗凝，取静脉血，边取边轻轻摇动，即制得全血。氧合血红蛋白（HbO2）液：加蒸馏水20ml，取全血0.1ml（3滴）盛于小烧杯中，混匀，此即HbO2液，呈鲜红色。碳氧血红蛋白（HbCO)液：

取上述HbO2液约5ml于试管中，通CO气体（浓硫酸与甲酸在CO发生器中反应发生）约10秒钟，HbO2即变成樱桃红色的HbCO溶液。1．样品的制备：将如上制备的2种血红蛋白液分别盛于比色杯内，在722型分光光度计上以蒸馏水为空白调节吸光度零点和100%（每一次读数均应用空白管调节零点和100%）。先从波长500~600nm分别测定HbO2，碳氧血红蛋白的吸光度（在相应峰值的10nm范围内每隔2nm记录一次吸光度读数，其余均每隔10nm记录一次吸光度读数）。吸光度测定：