实验七人体性染色质体的观察.pptVIP

实验七人体性染色质小体的观察2009年11月一、实验目的掌握人体性染色质的检测方法；观察人体性染色质的形态特征及存在部位；为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考条件；了解雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制。二、实验原理1949年等研究发现雌猫神经细胞核膜内凝缩的深染小体[性染色质体(sex-chromatinbody)或巴氏小体(Barrbody)]，而雄性个体细胞中则没有。进一步研究发现：所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象：浓缩、染色深、无活性；细胞分裂期可形成正常的染色体形态；复制时间比有活性的X染色体稍迟一些。BDACEBarr小体的数目=n-1（n为X染色体数目）正常男人的体细胞间期核中Barr小体为0；XXXX女人的体细胞间期核中Barr小体为3。正常女人的体细胞间期核中Barr小体为1；XXX女人的体细胞间期核中Barr小体为2；231为什么正常男女之间的X染色质存在差异？为什么女性两个X染色体上的每个基因座的两个等位基因所形成的产物，不比只有一个X染色体半合子男性的相应基因产物多？为什么某一X连锁的突变基因在纯合子女性的病情并不比半合子的男性严重？定义：具有两份或两份以上的基因量的个体与只有一份基因量的个体的基因表达趋于一致的遗传效应。举例：雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化（失活），只有一条X染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的。补偿方式剂量补偿效应

（dosagecompensationeffect）哺乳动物X染色体随机失活或父源X染色体失活有袋动物父源X染色体失活黑腹果蝇雄性个体X染色体基因表达水平加倍秀丽线虫雌性个体两条X染色体基因表达水平减半染色质常染色质：折叠程度低，处于伸展状态，染色时着色浅。DNA主要是单一序列和中度重复序列。处于常染色质状态是基因转录的必要条件。异染色质折叠程度高，处于凝缩状态，染色时着深。组成型异染色质：除复制期外，均处于凝缩状态，处于中期染色体的着丝粒区、端粒、次缢痕等节段。具有明显的遗传惰性，不转录也不编码蛋白。兼性异染色质：指某些细胞或某一发育阶段，原来的常染色质凝缩失去基因转录活性而成。雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化，在上皮细胞中形成巴氏小体、在多核白细胞中形成“鼓槌”。莱昂假说(Lyonhypothesis)1961年，MaryLyon提出了X染色体失活的假说。其实验依据是对小鼠X连锁的毛色基因的遗传学观察，发现雌性小鼠毛色杂合体不表现显性性状，也不是中间类型，而是显性隐性两种颜色嵌合组成斑点状（不是共显性）。而雄性小鼠却从不表现斑点状毛色，而是显性或隐性单一颜色的毛色。内容：巴氏小体是一条失活的X染色体；哺乳动物雌性个体两条X染色体的其中一条在受精后失活；两条X染色体中哪一条失活是随机的；在同一哺乳动物的体细胞中，有些父源X染色体失活，有些为母源失活。失活在胚胎早期发生(人类在胚胎发育16天时)，失活的X染色体在以后分裂中不会复活；当生殖细胞形成时，失活的染色体可恢复。杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。证据：1）玳瑁猫毛皮上的黑色和黄色班块——XOXo人类葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定GdA/GdBX染色体失活的机制X染色体上都存在与失活有关的Xic（X染色体失活中心）位点，Xic位点的丢失会影响萊昂化，胚胎不能存活。X染色体失活分起始、维持、扩散3个阶段。X染色体失活只是部分失活，在失活染色体的Xic位点上发现有活性的基因（XIST）。Xic的失活作用XIST基因的表达X-染色质的形态特征及所在部位：X-染色质的形态表现为一结构致密的浓染小体；轮廓清楚；大小1～1.5μm；常附着于核膜边缘或靠近内侧；形状为凸形、三角形、卵形、短棒及双球形等。正常女性口腔黏膜细胞中出现率：30～50%。巴氏小体器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、解剖针等。试剂：改良苯酚品红、60%醋酸、45%冰醋酸、95%乙醇实验材料：女生口腔黏膜细胞（男生为对照）；女生毛囊细胞（男生为对照）第一步第二步第三步三、实验用品口腔颊部粘膜细胞巴氏小体观察四、实验操作1、口腔颊部粘膜细胞巴氏小体观察（1）取干净载玻片，用记号笔在将涂细胞的一面