关于高效液相色谱-串联质谱法测定牛肉中β-激动剂类药物残留的研究 .pdf

关于做夜相色谱-串联质谱淑I定牛肉中阳激动剂溜球留的研

究

1实验部分

1.1实验材料设备

1.1.1实验材料

牛肉：经检验6-受体激动剂呈现阴性的牛肉，绞碎均质。

1.1.2主要剂

甲醇、乙月青、甲酸、乙酸乙酯、叔丁基甲醍、高氯酸、氨水、氢氧化钠溶液、乙酸铉缓冲液、甲酸水溶液-甲醇溶

液（体积比=90:10）、葡萄糖醛酸酶（30U・mL-1）。

对照品：莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇（含量均＞98%）。同位素内标：莱克多巴胺-d3、克伦特罗-d9、沙丁

胺醇-d3。

1.1.3主要仪器设备

TSQQuantis型号高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）；分析天平；氮吹仪；水平振荡器；固相

萃取装置等⑴。

1.2混合对照品溶液及内标液的制备

准确称取莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇各10mg放置于100mL的棕色量瓶内，用甲醇定容，将其制备为0.1

mg-mL-1的混合对照品溶液4°C避光保存备用，临用时可用甲醇稀释为所需浓度混合液。称取3种同位素内标10mg

同样的方法配置为100pgmL-1的储备液保存，用时可用甲酸水溶液稀释为100pgL-1的混合液，获得内标工作液［2］。

1.3样品前处理

1.3.1酶解和提取

称取新鲜或者冷藏解冻的料2g置于50mL离心管内，力nA0.2mol-L-1的乙酸铉缓冲液6mL、葡萄糖醛酸

酶40jjI涡旋均匀，于避光条件下37°C水浴振荡16h放至室温备用。

1.3.2萃取、净化、浓缩

取上步骤获得备用液，加入100ng-mL-1的内标液100pL涡旋均匀并在8000r-min-1的条件下离心8min取

上清液，加入5mL高氯酸溶液（0.1mol-L-1）涡旋均匀，用高氯酸调节pH至1在8000r-min-1的条件下离心8min

在获得的上清液中加入NaOH溶液（10mol-L-1），调节pH至10。加入乙酸乙酯15mL中速振荡5min在5000r-min-1

的条件下离心5min获取上层有机相。对于上层水相，可加入叔丁基甲酰10mL进行提取，将前后2次提取的有机

相进行合并，50°C氮吹，并用甲酸溶液（2%）溶解备用［3］。

应用混合型阳离子交换固相萃取柱进行净化，分别用3mL甲醇及3%甲酸活化莘取柱后，备用液过柱后用2%甲

酸与甲醇各3mL淋洗、抽干，用5%的氨化甲醇溶液3mL洗脱后50°C氮吹。

用0.5mL甲醇-1%甲酸溶液溶解残余物后过滤膜(0.22pm孔径),获得供品溶液。

1.4仪器条件

色谱柱：WatersC18(XbridgeBEH2.5pm)；柱温：40°C；进样量：20吐；流速：0.2mL・min-1；流动相：溶

剂A+溶剂B。梯度洗脱程序见表1。

表1流动相及梯度洗脱程序表

离子源：电喷雾(ESI+)；扫描方式：选择反应检测扫描(SRM)；离子喷雾电压：3500V；离子传输管温度:

320°C；蒸汽温度：350°C；鞘气流速：40Arb；辅助气流速：5Arb。

2结果与分析

2.1酶解温度的优化

通过查阅相关文献得知，B-葡萄糖醛酸酶适用的温度处于40〜110°C于料牛肉离心管内，力nA0.2mol-L-1

的乙酸铉缓冲液6mL、8-葡萄糖醛酸酶40jjL涡旋均匀后分别于避光条件下37、45、53、61、69°C水浴振荡16h

再经萃取、净化、浓缩后对3种受体激动剂含量进行检测，结果见表2。

表2不同酶解温度对B-受体激动剂测定结果的影响表

表2显示,当酶解温度在37〜45°C范围内时，3种伊受体激动剂的测定结果差距不明显,均与推荐值最接近，随

着温度的继续升高，在达到53°C后，测定值会有所降低，这可能因为温度过高会导致物质挥发丢失。所以，最合适的

酶解温度为37°C[4-5]O

2.2酶解时间的优化

设置样品酶解与提取前处理的酶解时间为37°C下水浴振荡8、12、16、20、24h再经萃取、净化、浓缩后对3

种6-受体激动剂含量检测，结果见表3。

表3不同酶解时间对-受体激动剂测定结果的影响表

表3显