禽流感H7N9血凝和血凝抑制试验培训课件.ppt

禽流感H7

血凝与血凝抑制试验;检测的目的〔与H7N9的关系〕;H7-Ab-HI试验方法;H7-Ab-HI阴阳性判定标准;质量控制

〔抗原及标准阴阳性对照〕;试剂相关信息;;;;;;血凝板竖起后观察;;;阿氏〔Alsevers〕液的配制：;1%鸡红细胞悬液的配制：

采集至少3只SPF公鸡〔非免疫的公鸡〕或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合〔4℃可保存7天左右〕。配制前用PH7.2的生理盐水洗涤3次每次均以离心机上1500-2000r/min(不得超过2000r/min，否那么会导致红细胞破裂，引起溶血)，离心10分钟左右。洗涤后，吸取沉积于管底的红细胞泥1mL，混合于99mL生理盐水中混匀。即得1%RBC。4℃可保存3天左右，假设出现溶血应重新采血，重新配制。;4单位抗原的配制

根据血凝试验测新城疫病毒抗原的血凝效价。如测得病毒原液HA=27，即27=128，那么配制4单位抗原需将病毒原液稀释128÷4=32倍

那么如果需要32mL4单位抗原，需要〔32÷32=1〕mL病毒原液和〔32-1=31〕mL生理盐水。;;100%凝集;;HI本卷须知

每次试验需做1份标准阴阳性血清的对照，对照成立方可判定试验结果。

阴性血清滴度不应超过2log2

阳性血清滴度应与标定的滴度相差不超过1个稀释度。

每次进行HI试验必须做4U抗原的反滴定，即测一下4U抗原的HA价是否准确。

如果HA价高1滴度〔实际为8U〕，那么HI价＋1

如果HA价低1滴度〔实际为2U〕，那么HI价―1;血凝抑制试验结果判定;;HA试验原理

病毒外表血凝素与鸡红细胞外表糖蛋白受体发生结合而发生凝集

检测病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量〔1个血凝单位＝106病毒颗粒〕;凝集;;HI试验原理;