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GB/TXXXXX—XXXX

附录A

(规范性附录)

除菌测试方法

A.1试验菌种及污染物的制备

A.1.1试验菌种的选择

试验用菌如下：

——大肠埃希氏菌Escherichiacoli(CGMCC1.90)；

——金黄色葡萄球菌金黄亚种Staphylococcusaureussubsp.aureus(CGMCC1.89等同ATCC

6538P)。

根据使用要求，也可选用其他菌种或菌株作为试验用菌。

所有菌种或菌株应由国家相应菌种保藏管理机构提供，并在报告中明示试验用菌种名称及菌株编

号。

实验室应按照国家相关安全规定使用试验微生物，如选用其他试验致病菌，实验室应具备与其危

害性相适应的生物安全防护等级；不涉及《人间传染的病原微生物名目录》中的第一类和第二类病原

微生物。

培养菌种使用的各种培养基组分，应符合菌种保藏管理机构的要求。

所有涉及微生物操作的器皿和材料都应提前进行灭菌，首选湿热灭菌（121℃，20min）。

A.1.2培养条件

如果菌种提供机构有特殊要求，应以其要求为准。没有特殊要求的，试验菌种的一般性培养条件

应符合GB/T21551.2中相关要求。

本标准的试验条件都是以大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌为例，如果用其他试验菌种，相应的试

验条件要随之改变。

A.1.3试验菌种的活化和菌液制备

将标准试验菌株接种于斜面固体培养基上，在（37±1）℃条件下培养24h后，在5℃～10℃下

保藏（不应超过1个月），作为斜面保藏菌。

将斜面保藏菌转接到平板固体培养基上，在（37±1）℃条件下培养24h，每天转接1次，不超

过2周，试验时应采用第3代～第5代、24h内转接的新鲜细菌培养物。

用接种环从新鲜培养物上刮适量新鲜细菌培养物，加入质量分数为0.85%的无菌生理盐水中，并

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依次做梯度稀释，选择菌液浓度为1.0×10CFU/mL～9.0×10CFU/mL的稀释液作为试验用菌液，按

GB4789.2的规定的方法进行计数。

A.1.4试验用污染物的制备

无菌污染物：10g小麦粉（符合GB/T1355中对标准粉的要求）、100mL蒸馏水、25mL南瓜

汁（不加水用慢磨机榨取）混合后煮沸均匀，再放入压力蒸汽灭菌锅内灭菌。

无菌污染物室温冷却后，与试验用菌液1：1混合均匀，即为试验污染物。

A.2试验仪器和设备

试验专用测量仪器应满足下述要求：

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——生化培养箱：最大允许误差±1℃；

——冷藏箱：5℃～10℃；

——干燥箱：0℃～300℃；

——二级生物安全柜；

——压力蒸汽灭菌器：最大允许误差±1℃；

——平皿、试管、移液枪、接种环、酒精灯等试验室常用器具。

A.3试验步骤

A.3.1试验前准备

辅食机应按照制造商的要求进行安装试运行。

试验前待测辅食机应连续运行2个标称的除菌程序，运行结束后，用75%的乙醇溶液冲洗容器内

壁2次，再用无菌水冲洗3次，自然晾干。

A.3.2试验前准备

辅食机应按照制造商的要求进行安装试运行。

试验前待测辅食机应连续运行2个明示的除菌程序，运行结束后，用体积分数75%的乙醇溶液冲

洗容器内壁2次，再用无菌水冲洗3次，自然晾干。

A.3.3试验用污染物的涂覆

取试验用污染物5g均匀涂覆待测辅食机容器内壁及刀片处，污染物涂覆完成后，放置于实验环境

温度下静置15min。

A.3.4除菌试验

污染物涂覆静置15min后，按照制造商明示的除菌程序运行1个周期。待程序结束后，用10mL

质量分数为0.85%的无菌生理盐水充分吹洗容器内壁