经典液相色谱法.pptVIP

***********************************为了提高测量精度，通常相同体积同一浓度的对照品溶液点2个斑点，相同体积的样品溶液点3～4个斑点，且交叉点样于同一薄层板上，展开，测定。第62页，共65页，星期日，2025年，2月5日*除了应用外标两点法进行定量分析外，如标准曲线通过原点也可采用外标一点法第63页，共65页，星期日，2025年，2月5日*第6节纸色谱法（PC）纸色谱法是以纸作为载体的色谱法。按分离原理属于分配色谱法的范畴。固定相一般为滤纸纤维上吸附的水分，流动相(展开剂)为有机溶剂。除水以外，滤纸也可以吸留其他物质，如甲酰胺或缓冲溶液等作为固定相。由于组分在两相间的分配系数不同，因而随展开剂迁移的速度不同而达到分离的目的。分配系数大的组分，移动速度慢，Rf值小。第64页，共65页，星期日，2025年，2月5日*感谢大家观看第65页，共65页，星期日，2025年，2月5日*********************************************************排斥极限与全渗透之间对应的分子量范围称为凝胶的分子量范围。选择凝胶时应使试样的分子量落入此范围。当组分的分子量在凝胶的分子量范围之内时，其保留体积与渗透系数有如下关系:VS为凝胶孔隙的总体积（固定相体积），Vm为凝胶的粒间体积（流动相体积）二、固定相和流动相第30页，共65页，星期日，2025年，2月5日*固定相常用的凝胶有葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和.聚苯乙烯凝胶等。要选择对样品的溶解好，又能润湿凝胶，粘度要低的溶剂，否则，会限制分子扩散而影响分离效果。一般水溶性试样选水溶液，非水溶性试样选四氢呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有机溶剂。流动相第5节薄层色谱法（TLC）第31页，共65页，星期日，2025年，2月5日*将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离分析的方法称为薄层色谱法（TLC）。铺有固定相的板子称为薄层板简称薄板。在薄层色谱法中使用的流动相又称为展开剂。按分离机制薄层色谱法可分为吸附、离子交换、分配和分子排阻色谱法等。按薄层板的分离效率不同，又可分为经典薄层色谱法(TLC)及高效薄层色谱法(HPTLC)。本节主要讨论应用最为广泛的吸附薄层色谱法。操作过程：第32页，共65页，星期日，2025年，2月5日*特点：设备简单，操作方便，分析速度快，分离效率高，灵敏度高，显色方便，结果直观，预处理简单。应用：定性、药物杂质检查、纯度测定一、基本原理1.分离过程将混合组分的试液,点在铺了吸附剂的玻璃板一端,在密闭容器中用适当的溶剂(展开剂、流动相)展开,各组分不断地被吸附,解吸附…随展开剂前移,利用吸附剂对不同组分的吸附能力(吸附平衡常数)不同,产生差速迁移,而达到分离。第33页，共65页，星期日，2025年，2月5日*2.比移值RfA=a/cRfB=b/c一般要求组分的值在0.2～0.8之间。Rf=0，被固定完全吸附,K??Rf=1，组分不被固定相吸附,K?0)0?Rf?1第34页，共65页，星期日，2025年，2月5日*比移值是薄层色谱的基本定性参数，它说明组分在色谱系统中的保留行为。比移值的数值除与组分的性质有关外，还与薄层板的性质(活性等)、展开剂的性质(极性、组成等)和温度有关。影响Rf值的因素很多，测量重复性较差3．相对比移值在一定条件下，吸附平衡常数越大，容量因子k就越大，则比移值越小。第35页，共65页，星期日，2025年，2月5日*讨论对照品与被测组分在完全相同条件下展开，可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；对照品可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分。相对比移值Rst与组分、对照品性质等因素有关，可以大于或小于1。AB对cab第36页，共65页，星期日，2025年，2月5日*二、固定相吸附柱色谱的固定相薄层色谱也可以使用,如硅胶、Al2O3等，但粒度比柱色谱更细。硅胶微带酸性，适用于酸性及中性物质的分离。薄层色谱用硅胶粒度为～40μm，硅胶G硅胶