DNA带硅珠直扩自动化提取方法技术规范.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT65.020.20

CCS

FORMTEXTB62

FORMTEXT3211

FORMTEXT镇江市地方标准

DBFORMTEXT3211/TFORMTEXT—FORMTEXT2025

FORMTEXT?????

FORMTEXTDNA带硅珠直扩自动化提取技术规范??

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FORMDROPDOWN

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FORMTEXT2025-FORMTEXT??-FORMTEXT??发布

FORMTEXT2025-FORMTEXT??-FORMTEXT??实施

FORMTEXT镇江市市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DB3211/T—2025

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由镇江市公安局归口。

本文件由镇江市公安局刑事科学技术研究所提出。

本文件由镇江市公安局刑事科学技术研究所起草。

本文件主要起草人：郦旭东、王禹、王卫东、毛坤云、纪天元、仲博、郝兴龙、陈嘉佳。

STYLEREF标准文件_文件编号DB3211/T—2025

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STYLEREF标准文件_文件编号DB3211/T—2025

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DNA带硅珠直扩自动化提取技术规范?????

范围

本文件规定了采用带硅珠扩增法的DNA自动化提取技术规范。

本文件适用于法庭科学DNA检验鉴定领域。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T43633法庭科学DNA实验室建设规范

GB/T43635法庭科学DNA实验室检验规范

GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求

术语和定义

硅珠：二氧化硅微粒，在高浓度的硫氰酸胍存在时，能特异性的吸附DNA。

带硅珠直扩：在进行聚合酶链式反应（PCR扩增）时，将扩增预混液与已提纯干燥的带模板硅珠混合，模板直接释放到扩增预混液中反应。

自动化设备的功能和参数

高精度机械臂，三轴移动精度应达到1mm；

高精度移液器，移液精度达到0.2μL；

平板离心机；

24孔板金属浴和震荡混匀装置，温度范围30℃~100℃；

96孔板金属浴和震荡混匀装置，温度范围30℃~100℃；

空气循环装置，设备内部空间保持负压和空气单向循环；

紫外线消毒灯，照射设备内部空间全部表面，灭活DNA；

录音录像设备，全程记录实验过程。

环境控制

5.1实验室内温度、湿度和洁净度要满足设备正常运行的需要，配备必要的温度、湿度控制设备以及安全设施。

5.2实验室的光线、电源、水源、消防、防污、防尘、防震、电磁屏蔽、接地电阻、生物安全、装饰装修等应符合仪器设备和检验的要求。

5.3为防止气溶胶的污染，实验室应定期通风和消毒。对于设置有通排风系统的实验室，各区域应独立送、排风，以避免交叉污染。

5.4实验室应有明确的区域标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。检验鉴定流程应单项流动，必要时实现人员的单向流动。

5.5实验室应设有限制进入的标识和相应措施，防止未授权者访问。

5.6实验室应制定废弃样品和有害废弃物处置的程序。

实验器材和方法

主要器材和试剂

自动化提取设备；

吸附液；

漂洗液；

硅珠悬液；

TNE缓冲液

SDS；

DTT；

蛋白酶K；

无水乙醇和70%乙醇；

TE缓冲液；

纯水。

方法

6.2.1将物证上的DNA通过擦取、粘取、吸取、剪切、刮取等方法分离出来，取适量，加入自动化设备的提取装置中；

6.2.2加入TNE缓冲液、SDS、蛋白酶K和DTT，56℃消化2h以上；

6.2.3离心，去除载体，在上清中加入3倍体积的吸附液、硅珠悬液，混合后置室温15min；

6.2.4离心去上清，加入漂洗液，混合；

6.2.5离