《分子生物学实验技术》课件：DNA提取与PCR扩增技术详解.pptVIP

*************************************PCR抑制因素及解决方案抑制因素来源解决方案多糖和多酚植物样本使用CTAB法提取，添加PVP或BSA血红蛋白/血红素血液样本稀释样本，使用专用提取试剂盒，添加BSA胆盐和脂质粪便样本使用特殊提取方法，添加BSA或甜菜碱腐殖酸土壤样本稀释，使用专用试剂盒，添加BSA或DMSO残留酚和乙醇核酸提取过程额外纯化步骤，沉淀彻底干燥EDTA过量洗脱缓冲液增加Mg2?浓度，稀释模板PCR抑制物是影响PCR成功的主要因素之一，尤其是从复杂样本中提取的DNA。样品中的抑制物会干扰DNA聚合酶活性、与模板DNA结合或干扰引物退火，导致扩增效率降低甚至完全抑制。识别和克服PCR抑制是实验成功的关键。除了上述方法，还可通过添加增强剂如DMSO(1-10%)、甘油(5-20%)、甜菜碱(0.5-2.5M)或BSA(0.1-0.8μg/μl)来改善PCR反应。使用对抑制物不敏感的聚合酶(如KOD聚合酶)也是有效策略。对于困难样本，可使用嵌套PCR或全基因组扩增技术提高灵敏度。设计短扩增子(200bp)可提高从降解样本中获得阳性结果的机会。PCR结果分析和解释阳性对照阳性对照是已知含有目标序列的样本，用于验证PC