药物分析课件：药效成分含量测定.pptVIP

*************************************毛细管电泳法概述原理毛细管电泳(CE)是在充满电解质的毛细管中，在高电压作用下使带电分子按电荷/质量比差异分离的技术。其分离机理包括电泳迁移(带电分子在电场中移动)和电渗流(缓冲液在毛细管中的整体流动)两个过程。不同物质因带电性质和大小不同而以不同速率迁移，从而实现分离。1仪器组成CE系统主要包括高压电源(通常0-30kV)、毛细管(内径25-100μm，长度20-100cm)、样品进样系统、检测器和数据采集系统。毛细管通常由熔融石英制成，内壁常进行化学修饰以控制电渗流和减少样品吸附。检测窗口通常位于毛细管出口端附近，常用检测器包括UV、荧光和质谱等。2应用范围CE适用于分析离子化或可离子化的药物，包括小分子药物、蛋白质药物、核酸药物等。其特点是分离效率高、样品消耗少(纳升级)、分析速度快且溶剂消耗极少。在药物分析中主要用于光学异构体分离、蛋白质表征、杂质分析和复杂制剂分析等领域，是HPLC的重要补充。3毛细管电泳法操作步骤1缓冲液选择缓冲液选择是CE分析的核心，其组成、pH值和浓度直接影响分离效果。常用缓冲液包括磷酸盐、硼酸盐、TRIS等，浓度通常为10-100mM。pH值决定样品的离子化程度和毛细管壁硅醇基的离解状态，从而影响电泳迁移和电渗流。选择时应考虑缓冲容量、导电性和与检测体系的兼容性。2分离条件优化分离条件优化包括电压选择(一般10-30kV)、温度控制(通常20-30℃)、添加剂选择(如表面活性剂、有机溶剂、手性选择剂等)。电压越高分析速度越快但产热也越多；添加剂可改变选择性，如十二烷基硫酸钠(SDS)可用于非离子化物质分离，环糊精类可用于手性分离。3数据分析数据分析基于电泳图，包括迁移时间、峰面积或峰高等参数。定性分析通过与标准品迁移时间比较并结合光谱数据；定量分析通常采用峰面积法，结合标准曲线计算含量。数据处理需考虑迁移时间漂移、峰形变化等问题，必要时进行校正，如使用内标法校正迁移时间变化。毛细管电泳法注意事项样品前处理CE样品前处理相对简单，但考虑到进样量极少(通常为nL级)，样品浓度应足够高以确保检测灵敏度。样品溶液应经滤膜过滤(0.22μm)去除颗粒物，并确保样品溶剂与运行缓冲液导电性相近，否则可能导致样品堆积效应影响分离。对于生物样品，常需除蛋白处理，如沉淀、超滤等。毛细管维护毛细管表面状态对分离重现性至关重要。新毛细管使用前需预处理活化，通常依次用1MNaOH、0.1MNaOH、水和运行缓冲液冲洗。每次运行前用缓冲液冲洗以保持管内环境一致。长期使用的毛细管可能因样品吸附导致分离效果下降，应定期用NaOH、酸或有机溶剂再生。必要时更换毛细管。定量方法选择CE定量分析常用方法包括外标法、内标法和标准加入法。由于进样体积小且难以精确控制，外标法精密度较差；内标法通过加入与分析物性质相近但能完全分离的内标物，可有效校正进样量波动和迁移时间变化；标准加入法适用于复杂基质样品，可消除基质效应影响，但工作量大。质谱法概述1结构确证提供分子量和结构信息2高灵敏度可检测痕量药物和代谢物3高选择性能区分复杂基质中的目标物4多组分分析可同时分析多种药物成分质谱法(MS)是测量气态离子质荷比(m/z)及其相对丰度的分析技术，能提供物质的分子量和结构信息。其基本原理是将样品分子电离，形成带电离子，在电场或磁场中按质荷比分离，最后检测离子并记录质谱图。质谱图是离子信号强度与质荷比的关系图，可用于物质的定性和定量分析。现代质谱仪种类繁多，包括单四极杆、三重四极杆、离子阱、飞行时间、磁式等类型，不同仪器适用于不同分析需求。质谱可单独使用，也可与色谱技术联用(如GC-MS、LC-MS)形成强大的联用技术，已成为药物分析、代谢组学研究和临床诊断的重要工具。质谱法离子化技术电喷雾离子化(ESI)ESI是最常用的软电离技术，适用于极性、热不稳定和高分子量化合物。其原理是将溶液样品通过带高电压的细管喷射成带电液滴，经过溶剂蒸发和库仑爆炸形成气相离子。特点是多电荷离子产生，使大分子在相对较小m/z范围内检测，非常适合蛋白质、多肽等生物大分子分析。基质辅助激光解吸电离(MALDI)MALDI是另一种软电离技术，主要用于高分子生物样品分析。样品与基质(小分子有机酸)混合后被激光脉冲照射，能量被基质吸收并传递给样品分子，导致样品电离和解吸。MALDI主要产生单电荷离子，谱图简单，常与飞行时间质量分析器联用，适合蛋白质、多糖等大分子分析。大气压化学电离(APCI)APCI是介于硬电离和软电离之间的技术，适用