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l植物病毒可用作蛋白质过表达和序
列特异的基因沉默的表达载体,两者
都是功能基因组学研究工具.
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病毒诱导的基因沉默(VIGS)的获得
l1.构建载体
l目的基因替换病毒中的与病毒复制、运动无关
的基因
l直接插入到病毒基因组中
l2植物的转化
l农杆菌
l3病毒携带目的基因在植物中复制和传播
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原理
lRNAi
病毒复制过程中形成的双链RNA触发植物中
与之具有高度序列一致性的mRNA降解。
Dicer酶
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l优点：1、试验周期短
2、可以研究T-DNA标记的敲除突变体
和表达了沉默诱导基因的转化子中有致死表型
的基因
缺点：1、不易获得针对特异物种的病毒载体
2、感病表型可能与靶基因沉默表型混淆
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VIGS应用的病毒和载体
l烟草：烟草花叶病毒TMV
l大麦：大麦条纹花叶病毒barleystripe
mosaicvirus
l拟南芥：卷心菜曲叶病毒cabbageleafcurl
virus
l番茄：烟草脆裂病毒tobaccorattlevirus
(TRV)
l马铃薯：PotatovirusX(PVX)
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实验目的
l构建适合不同植物（豆科）的VIGS载体
l选用的病毒：Peaearlybrowningvirus
(PEBV)
原因：1、与TRV同属
2、已建成带有GFP报告基因的表达载体
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结果1、PEBV侵染克隆的构建
双元载体系统(binaryvectorsystem)
农杆菌介导的植物转化机理
本实验用的载体的构建
植物转化：农杆菌注射法（agro-inoculation）
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植物转化：农杆菌注射法agro-inoculation
l转化pCAPE1、pCAPE2-GFP保存的农杆菌液分别用
含有50ng/μL卡那霉素和100ng/μL利福平的LB
液体培养基培养过夜。
l培养到时，取菌液加入到1.5mL离心管中，离心，
用含10mMNaCl、0.1mM乙酰丁香酮、1.75mMCaCl2
的培养基重悬，静置90min。
l两种转化质粒的农杆菌等量混合。
l注射植物。嫩叶用1mL注射器在远轴端挑叶背，
但不挑破，吸取制备好的菌液注射。
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检测转化体系
l21天后，在注射
叶子上面新长出
来的叶子上检测
到绿色荧光
l说明转化体系成
功。
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结果2、八氢番茄红素去饱和酶基因（PDS）
的沉默
lPDS是产生类胡萝卜素的关键基因，沉默后产
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