细胞培养概述(1).ppt

***M期后期概况要点:染色单体分离.后期开始时间:5~7min最快特点:

染色体向两极移动移动机制：微管2个运动过程动粒微管：染色体动粒部位不断解聚。使动粒微管缩短使染色体向极移动(拉动)极微管

加速聚合、伸长，使相互重叠的部分产生滑动使纺缍体两极之间距离加大，纺缍体延长(推动)细胞形状略变长五、分子生物学1.DNA分离、分析2.基因导入3.基因表达的原位检测六、生物技术1.疫苗的制备2.细胞工程抗体七、药物开发药理、毒力和药效试验八、细胞分化如干细胞研究九、肿瘤学研究发生、发展、浸润、转移和转化等十、细胞衰老、凋亡细胞培养技术复习思考题细胞培养技术的概念？细胞培养技术的优缺点？体外细胞培养的方式及特点？体外培养细胞的生长形态分类？5.解释下列常用术语：1).细胞系（cellline）：2).细胞株：3).原代培养：4).传代培养：5).转染（transfection）：6).lipofection：6.细胞培养的条件及设备？7.原代培养技术的过程？8.传代培养技术过程？9.每代细胞基本的生长过程？10.细胞培养技术的应用？*********(**细胞的接触抑制

密度依赖性生长仰制增殖的密度抑制实验方法：3T3细胞，接种105于6cm培养皿，

5d细胞计数于加入10％、20％、30％牛血清的

培养液中，结果：结果：①10％血清：20hr后铺满以后至5d细胞数不再增加(细胞数约106／6cm皿)

密度抑制30%血清：以后经常换液至5d，细胞密度继续增加

(可达6xl06／6cm皿)说明:密度抑制---铺满后

不再增殖,血清可降低密度抑制③但当用此培养液，于转化的3T3细胞(SV3T3)却生长良好.表示：转化细胞的密度抑制降低.

可生长至较高的密度总的说明：①细胞生长有密度抑制②血清可降低密度抑制③转化细胞可降低密度抑制特点:细胞系的生命期--归宿

有限细胞系:一般衰退、死亡

转化:永生化:

自发性转化

诱导转化

自发性转化:偶而,个别通过危机--转化.培养的细胞，由于尚不明确的原因---使培养的细胞发生自发的转化,转化细胞的性状可传递给予代细胞

诱导转化

诱导因素:化学、幅射、病毒等

每个细胞的生活周期

概念与细胞传代的区别G1期

时期:有丝分裂后期,子细胞继续生长时期时间:变化大,几小时-几天—几年-几十年特点：细胞生长主要阶段,能对各种环境信号,综合、协调、作出反应以确定是否进入S期时间长度变异大：人体200多种细胞，周期时间不同,主要在G1如：胚胎早期卵裂细胞几乎测不到淋巴细胞数小时神经元细胞终生停在G1期?S期

概况时期:DNA合成时期基本特点:为分裂作准备,DNA复制时间：约10h左右DNA合成开始时，急剧形成DNA聚合酶及4种脱氧核苷酸以后，合成DNA等期末，DNA加倍DNA复制是增殖的基础完成DNA复制，才能入M期．

G2期概况：

时期:分裂之前基本特点：进行诱发细胞进入分裂的

各种生化变化主要合成分裂有关的蛋白质

尤以细胞骨架，重新组装的蛋白质体积增大1倍时间：较短，约2~3hrM期概况时期最终阶段基本特点形态、结构变化最大，

细胞增殖标志时间短，较恒定分期前、中、后，末M期前期概况:染色质凝集，核被膜崩解，纺缍体形成.20~30分特点:1.染色体组装染色质疑集，M期开始分裂前须先染色质组装成染色体染色质逐