《基因技术》课件2.pptVIP

基因编辑技术革命性生物技术，精确修改生物体遗传物质

课程概述基本概念与历史基因编辑定义与发展历程技术原理与方法主要编辑系统工作机制应用领域医学、农业、工业应用案例伦理与未来

什么是基因编辑？定义有目的地修改生物体基因组特定位置的技术目的纠正有害突变，改善生物特性基本原理

基因编辑的历史11970年代重组DNA技术出现21980年代基因敲除小鼠技术发展31990年代锌指核酸酶技术(ZFN)初现42000年代TALEN技术开发成功52012年CRISPR/Cas9技术问世

基因编辑技术的发展历程第一代：锌指核酸酶开创性但设计复杂2第二代：TALEN提高特异性但仍难设计第三代：CRISPR/Cas9简便高效革命性突破

基因编辑的主要方法ZFN技术锌指蛋白与核酸酶结合最早开发的精准编辑技术TALEN技术转录激活因子样效应物比ZFN更灵活CRISPR/Cas9细菌免疫系统改造革命性突破

ZFN技术原理锌指蛋白与FokI核酸酶融合特异性识别DNA序列引入双链断裂优点高特异性无需PAM序列缺点设计复杂成本高构建周期长

TALEN技术原理TALE蛋白与FokI核酸酶融合模块化设计识别DNA序列优点设计更灵活特异性高缺点构建仍复杂大分子量影响递送效率

CRISPR/Cas9技术11987年首次发现CRISPR序列22005年确认CRISPR在细菌免疫中的作用32012年证明可用于基因组编辑42013年首次应用于人类细胞编辑

CRISPR/Cas9系统组成Cas9蛋白核酸酶活性切割双链DNA识别PAM序列sgRNA引导RNA决定靶位点特异性约20个碱基互补配对

CRISPR/Cas9的优势简单高效仅需设计sgRNA，无需复杂蛋白工程多基因编辑可同时编辑多个基因位点成本低合成简单，实验周期短适用性广几乎所有生物体都可使用

CRISPR/Cas9的局限性脱靶效应可能在非目标位点切割DNA导致意外突变影响编辑安全性PAM序列依赖性需要特定PAM序列限制可编辑位点典型Cas9需要NGG序列大片段插入效率低基因敲入效率不高HDR效率低于NHEJ

基因编辑的作用机制DNA双链断裂（DSB）编辑工具在特定位点切割DNA产生双链断裂触发细胞修复机制细胞修复机制两种主要修复途径1.非同源末端连接(NHEJ)2.同源定向修复(HDR)

非同源末端连接（NHEJ）双链断裂编辑工具切割DNA末端处理断裂末端调整直接连接不需模板直接连接出现插入或缺失随机indel突变

同源定向修复（HDR）双链断裂编辑工具切割DNA提供模板外源修复模板同源重组按模板序列修复精确修复准确引入目标变化

基因编辑的类型基因敲除使基因失活基因插入添加新基因基因替换用新序列替代原序列

基因敲除（Knock-out）原理通过NHEJ引入移码突变导致基因功能丧失产生提前终止密码子应用案例CCR5基因敲除阻断HIV感染肿瘤相关基因功能研究无角牛育种

基因插入（Knock-in）原理通过HDR在特定位点插入序列需要提供外源DNA模板精确添加新功能应用案例荧光标记基因插入细胞追踪人源化动物模型构建作物新性状导入

基因替换1定点切割在目标位点产生DSB2模板提供引入含有目标序列的修复模板3HDR修复细胞用新序列替换原序列

基因编辑的新技术碱基编辑无需双链断裂单碱基精确替换减少脱靶风险先导编辑PrimeEditing更精确编辑方式扩大编辑类型

碱基编辑技术胞嘧啶碱基编辑器（CBE）将C-G转换为T-A胞嘧啶脱氨酶+Cas蛋白无需双链断裂腺嘌呤碱基编辑器（ABE）将A-T转换为G-C腺嘌呤脱氨酶+Cas蛋白扩展编辑范围

先导编辑技术原理结合逆转录酶的Cas9变体pegRNA包含目标序列和修复模板信息优势可实现所有类型点突变、小插入和缺失安全性仅切割单链DNA，脱靶风险更低

基因编辑在医学领域的应用遗传病治疗修复致病突变1癌症治疗增强免疫细胞传染病防治阻断病毒感染药物开发靶点验证

遗传病治疗单基因遗传病镰状细胞贫血β-地中海贫血囊性纤维化杜氏肌营养不良复杂遗传病心血管疾病风险降低神经退行性疾病代谢性疾病

癌症治疗CAR-T细胞疗法编辑T细胞表达嵌合抗原受体增强识别肿瘤能力已成功应用于白血病治疗肿瘤抑制基因修复修复p53等抑癌基因恢复细胞正常功能免疫检查点调控编辑PD-1/CTLA-4表达增强抗肿瘤免疫

传染病防治HIV/AIDS编辑CCR5基因阻断病毒入侵攻击病毒基因组病毒性肝炎切除整合的HBVDNA破坏病毒复制呼吸道病毒靶向病毒基因组阻断感染提高宿主抵抗力

药物开发靶点验证敲除基因确认药物作用位点细胞模型构建疾病相关细胞系药效筛选高通量筛选潜在药物个体化医疗基于基因型优化治疗方案

基因编辑在农业领域的应用作物改良抗病虫害，增产，抗逆性动物育种改善生产性能，疾病抗性食品安全减少过敏原，提高营养可持续农业减少