浙江高考生物一轮复习讲义：微生物的利用.pdfVIP

第30讲微生物的利用

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1.大肠杆菌的培2.分离以尿素为氮源的

VV

养和分离微生物

考点一微生物的培养和分离

fl知识梳理

1.大肠杆菌

(D特性：大肠杆菌革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌,在肠道中一般对人无害，

但若进入人的泌尿系统,就会对人体产生危害。

(2)用途：基因工程技术中被广泛采用的工具。

2.细菌的培养和分离

(1)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖,分裂速度很快，约20min分裂一次。

(2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌

的培养物。

(3)细菌分离的方法与特点

分离方法特点

划线分离法操作简单

涂布分离法操作复杂，单菌落更易分开

3.大肠杆菌的培养和分离实验

(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,培养

后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。

(2)实验步骤

培养基灭菌50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿高压蒸

汽灭菌

倒平板将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形

V成平面

接种

丁在装有液体培养基的耳角瓶中接种大肠杆菌，培养12h

用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培

划线分离

1养基的平板上连续划线,盖好培养皿

V

培养皿倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培养箱中培养12-24h

培养观察

后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落

(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离消除污染杂菌的通用方法,也用于筛选高表达量

菌株的最简便方法之一。

4.微生物两种常用的接种方法比较

比较划线分离法涂布分离法

工具接种环玻璃刮刀

通过接种环在琼脂固体培养基表面连将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀

续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表

原理分散到培养基表面。在数次划线后培面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚

养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，

来的肉眼可见的细胞群体，即菌落从而能在培养基表面形成单个的菌落

特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂些

目