3.3 PCR的应用 课件人教版（2019）选择性必修3(共18张PPT).pptxVIP

PCR的应用基因工程拓展2025/3/26

连接两个DNA片段1.重叠延伸PCR

A．第一阶段过程中的产物是依赖引物1、引物2和引物3、引物4扩增的结果B．引物2和引物3上均含有与模板链不能互补的碱基C．PCR过程中需要先加热至90℃以上后再冷却至72℃左右D．第三阶段需要利用引物1和引物4获得目的基因1.下图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。分析不正确的是()练习C

定点突变1.重叠延伸PCR

1.逆转录PCRmRNA、RNA病毒RNA酶消化

2.热启动PCR55℃0℃减少反应起始时引物错配形成的产物

3.降落PCR从模板上扩增扩增先前的PCR产物第一阶段：扩增18-20个循环第二阶段：扩增20-25个循环提高特异性扩增

4.巢式PCR模板使用外引物，进行第一次PCR使用内引物，进行第二次PCR第一次PCR产物第二次PCR产物提高特异性扩增

切胶回收纯化目的产物

5.定量PCR实时定量检测PCR扩增产物染料法TaqMan探针法游离的染料几乎不产生荧光，和双链DNA结合后发射强荧光。探针完整时，不产生荧光；探针被Taq酶水解，R与Q分离，发出荧光。

5.定量PCR实时定量检测PCR扩增产物循环数荧光强度Ct值Ct值：荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数阈值1.样本中初始模板数量越多，Ct值越。2.若A样本Ct值为20，B样本Ct值为30，则A样本和B样本中模板DNA的比值为。检测样本CT如果值小于或等于30，且指数增长期明显，则检测结果呈阳性，表明患有新型冠状病毒。

练习

6.反向PCR扩增已知序列两侧的未知序列限制酶切自身环化反向PCR测序已知序列未知序列