一种将iPS细胞定向诱导分化到成熟神经元的方法[发明专利].pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN110656089A

(43)申请公布日

2020.01.07

(21)申请号201910975720.2

(22)申请日2019.10.15

(71)申请人上海捷易生物科技有限公司

地址201203上海市浦东新区张江路1238

弄恒越国际大厦3号楼2楼

(72)发明人杨通朱智陈珺

(74)专利代理机构上海沪慧律师事务所31311

代理人朱九皋

(51)Int.Cl.

C12N5/10(2006.01)

权利要求书1页说明书6页附图3页

(54)发明名称

一种将iPS细胞定向诱导分化到成熟神经元

的方法

(57)摘要

本发明涉及一种将iPS细胞定向诱导分化到

成熟神经元的方法，包括如下步骤：人iPS细胞的

无异源成份培养方式培养；iPS细胞定向诱导分

化到成熟神经元。本发明提供的将iPS细胞定向

诱导分化到成熟神经元的方法，安全、无病毒处

理、无外源血清成分干扰，并且可以从iPS细胞起

始，在体外培养中简便、快速、高效的诱导分化到

成熟神经元；而且在形成神经球之前有一次6倍

的细胞扩增，最终可以获取大量的成熟神经元，

为进一步研究和治疗神经系统疾病提供了一种

有效的细胞模型。

A

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8

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6

5

6

0

1

1

N

C

CN110656089A权利要求书1/1页

1.一种将iPS细胞定向诱导分化到成熟神经元的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S0，使用mTeSR1细胞培养液培养iPS细胞至60％～80％的密度后进行细胞传代，此时仍

用mTeSR1细胞培养液培养；

S1，iPS细胞传代第二天将mTeSR1细胞培养液更换为含有小分子化合物组合1的神经分

化培养液，培养6-7天；

S2，分散酶将细胞消化并按1孔传代6孔的比例转至基质胶包被处理过的孔板内，更换

培养液为含有小分子化合物组合2的神经分化培养液，培养6天；

S3，分散酶将细胞消化并悬浮培养于神经分化培养液中10-12天；

S4，Accutase细胞消化液将细胞消化3～8分钟后贴壁，神经元贴壁培养液中培养7-8天

可以得到成熟的神经元。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述神经分化培养液为混合成分，

其含有1:1(v/v)的DMEM/F12和Neurobasal培养基、0.5×N2细胞添加剂、0.5×B27细胞添加

剂、1×GlutaMax细胞添加剂及小分子化合物组合1。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述小分子化合物组合1的组成及

浓度分别为：CHIR

99021

3μM，SB

431542

2μM，LDN

193189

200nM。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述神经分化培养液为混合成分，

其含有1:1(v/v)的DMEM/F12和Neurobasal培养基、0.5×N2细胞添加剂、0.5×B27细胞添加

剂、1×GlutaMax细胞添加剂及小分子化合物组合2。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述小分子化合物组合2的组成及

浓度分别为：CHIR

99021

1μM，SB

431542

2μM，LDN

193189

200nM。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中，步骤S1中，所述神经分化培养液为

混合成分，其含有1:1(v/v)的DMEM/F12和Neurobasal培养基、0.5×N2细胞添加剂、0.5×

B27细胞添加剂、1×GlutaMax