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7种重组类型,而不是8种转化与遗传图谱trp2-his2的重组值为34%,trp2-tyr1的重组值为40%his2-tyr1的重组值为13%,Trp2,his2和tyr1是连锁的his2和tyr1连锁紧密trp2、his2及tyr1的排列顺序为:二、接合(conjugation)(一)、接合现象的发现和证实(二)、F因子及其在杂交中的行为(三)、中断杂交试验作图在原核生物中,接合是指遗传物质从供体—“雄性”转移到受体—“雌性”的过程。接合现象的发现和证实1.概念:通过细胞的直接接,原核生物的遗传物质从供体(donor)转移到受体(receptor)内的过程。黎德伯格和塔特姆接合试验(1946)基本培养基混合,平板上长出原养型菌落(++++)几种可能解释及其分析对上述试验结果原养型菌落可能产生于:回复突变;互养作用;转化作用;细胞融合1950年接合现象的发现和证实可以认为:直接接触(接合)是原养型细胞出现的必要条件Hayes(1952)研究表明:大肠杆菌存在两种类型品系:遗传物质的转移是单向的;接合(conjugation):遗传物质从供体(donor)转移到受体(receptor)的重组过程。接合现象的发现和证实WilliamHayes1918-1994(一)、F因子1.F因子:供体细胞内一种致育因子(fertilityfactor,F因子;sexfactor,性因子)控制。F–细胞F+细胞Hfr细胞:染色体上整合有F因子的菌株,称为Hfr菌株。F因子的存在状态F因子和F性伞毛(Fpillus)F性伞毛成了两个细胞之间原生质的通道(conjugationtube),接合管。F+细胞的F因子由接合管向F-传递,使F–受体变成F+。接合现象的F因子(二)接合过程
1.F+向F-的转移滚环复制(二)接合过程
1.Hfr的形成及向F-的转移Hfr细胞的形成
部分二倍体Fromlefttoright:Fran?oisJacobThePasteurInstitute(三)、中断杂交试验作图雅各布(Jacob,F)和沃尔曼(Wollman,E.)中断杂交试验(interruptedmatingexperiment)。菌株基因型:Hfr:thr+leu+aziStonSlac+gal+strsF–:thr–leu–aziRtonRlac–gal-strR中断杂交试验作图混合培养,一定时间取样,搅拌中断接合。中断接合的细菌接种不同培养基上测定重组体菌株基因型:Hfr:thr+leu+aziStonSlac+gal+strsF–:thr–leu–aziRtonRlac–gal-strR中断杂交试验作图Hfr:thr+leu+aziStonSlac+gal+strsF–:thr–leu–aziRtonRlac–gal-strR①.8分钟时:thr+进入F-细胞;8.5分钟时:leu+进入F-细胞;②.9分钟时:出现叠氮化物敏感的菌落,少数aziS基因进入F-细胞;③.11分钟时:出现对噬菌体T1噬菌体敏感F-细菌;④.18和25分钟时:分别出现乳糖和半乳糖发酵基因,即lac+和galb+进入F-细胞。中断杂交试验作图中断杂交试验作图Hfr菌株的基因是按一定的线性顺序依次进入F–菌株的,染色体从原点以直线方式进入F–细胞。基因位点离原点愈近,进入F–细胞愈早,反之则晚。根据中断杂交的实验,用Hfr基因在F–细胞中出现的时间为标准,可以作出大肠杆菌的遗传连锁图。88.59111825gal中断杂交试验作图用不同的Hfr菌株进行中断杂交实验所作出的大肠杆菌基因连锁图,其基因向F-细胞转移的顺序大不相同。中断杂交试验作图说明F因子和细菌染色体都是环状的,Hfr细胞染色体的形成,则因F因子插入环状染色体的不同位置,而形成了不同的转移原点和转移方向。中断杂交试验作图局限如果两个基因间的转移时间小于2分钟,用中断杂交法所得的图距不太可靠,应采用传统的重组作图法(recombinationmapping)。有两个紧密连锁的基因:lac+(乳糖发酵)和ade–(腺嘌呤缺陷型),Hfrlac+ade+×F–lac–ade–的杂交实验。两个基因
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