DB13_T2598-2017_花生品种真实性与纯度鉴定SSR法_河北省.docxVIP

ICS67.060

DB13

B22

河北省地方标准

DB13/T2598—2017

花生品种真实性与纯度鉴定SSR法

河北省质量技术监督局

发布

DB13/T2598—2017

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北农业大学提出。

本标准起草单位：河北农业大学。

本标准主要起草人：杨鑫雷、刘立峰、崔顺立、郭丽果、陈焕英、穆国俊、李洪珍。

I

DB13/T2598—2017

花生品种真实性与纯度鉴定SSR法

1

范围

本标准规定了利用SSR标记对花生品种真实性与纯度进行鉴定的术语和定义、原理、试剂材料、操

作程序、数据分析和判定规则。

本标准适用于利用SSR法对花生品种真实性与纯度鉴定的试验过程。

2

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2-1995

GB/T3543.4-1995

GB/T6682-2008

农作物种子检验规程

农作物种子检验规程

扦样

发芽试验

分析实验室用水规格和试验方法

3

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

品种在特征特性方面典型一致的程度，用供检样品中本品种的种子数占样品种子总数的百分率表

简单重复序列SSR（SimpleSequenceRepeat）

基因组中以几个核苷酸（一般为2个～6个）为重复单元的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序

列，又称微卫星标记。

注：模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜温度下，两条引物分别与DNA模板两条链上的一段互补

序列发生退火，并在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP(deoxy-ribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷三磷酸）为底

物，使退火引物延伸从而合成DNA。如此变性退火和合成DNA反复循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几

何倍数扩增。

1

DB13/T2598—2017

3.5

引物Primer

结合在模板DNA上的互补短链，提供3＇-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模板DNA的互补

链。

3.6

核心引物CorePrimer

SSR标记分析优先选用多态性高、稳定性好，识别能力强的一套引物的引物。

3.7

标准样品StandardSample

代表已知品种特征特性的育种家种子作为标准样品。

4

原理

花生基因组中存在着大量简单重复序列（SSR），由于SSR单元在不同基因型间重复次数不同，因

此同一位点的SSR在不同品种间往往具有丰富的长度多态性。利用PCR技术扩增每个位点的简单重复序

列，通过电泳分析其长度多态性，达到区别不同花生品种的目的。

5

试剂或材料

乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA·Na2）：分子式为C10H16N2O8Na2·2H2O，CAS60-00-4。

十二烷基硫酸钠(SDS)：分子式为C12H25NaO4S，CAS151-21-3。

聚乙烯吡咯烷酮（PVP）：分子式为(C6H9NO)41，CAS9003-39-8。

β-巯基乙醇：分子式为C2H6OS，CAS60-24-2。

2

DB13/T2598—2017

5.14

5.15

5.16

5.17

5.18

乙酸铵：分子式为C2H7NO2，CAS631-61-8。

十二烷基肌氨酸钠：分子式为C15H28NO3·Na，CAS137-16-6。

异丙醇：分子式为C3H8O，CAS67-63-0。

氯化钠：分子式为NaCl，CAS7647-14-5。

氢氧化钠：分子式为NaOH，CAS1310-73-2。

5.19TaqDNA聚合酶：保存条件为-20℃±2℃。

5.20

5.21

5.22

5.23

5.24

5.25

5.26

四种脱氧核苷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP），缩略为dNTPs。

硼酸：分子式为BH3O3，CAS11113-50-1。

丙三醇：分子式为C3H8O3，CAS56-81-5。

溴酚蓝：分子式为C19H10Br4O5S，CAS115-39-9。

二甲苯氰FF：分子式为C25H27N2NaO7S2，CAS4463-44-9。

丙烯酰胺：分子式为C3H5NO，CAS79-06-1。

甲叉双丙烯酰胺：分子式为C7H10N2O2，CAS110-26-9。

5.27N，N，N′，N′-四甲基乙二胺（TEMED）：分子式为C10H24N2，CAS150-77-6。

121.1gTris碱溶于适量水中，加HCl调pH至7.5，定容至1L，1.05kg/cm高压蒸汽灭菌15min，

2

4℃贮存。

称取84.78gLiCl置于