生物工程中游实验-植物组织培养基母液的配制.pptxVIP

序号实验项目名称实验学时实验类型实验教师每组人数实验时间1植物组织培养基母液的配制6验证6第3周四3-5大节2植物组织培养基的配制与灭菌6验证6第4周四3-5大节3无菌操作及植物愈伤组织诱导、胚胎培养技术6验证6第5周四3-5大节4植物组织、细胞培养的研究12设计性6第6-7周四3-5大节

1.实验室规则安全实验要求2.不得缺席小组长负责制3.人人动脑动手观测+实验报告4.设计性实验的要求：开放性小组团队协作→讨论→查阅资料→讨论→设计→可行性报告→定稿→实施→观测/记录/图片→小论文5.条件责任每组一套用具今天清点/签名/押金→实验结束后交还/退还押金

实验论文选登烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生摘要:在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。本实验通过烟草叶片外植体体外培养，诱导愈伤组织，并分化培养产生再生植株。Abstract：Intheplanttissueculture,themaintargetistoinducethecallusformingandmorphogenesis,thusmakesacell,atissueoranorganinvitroformingthemicrosporesbydedifferentiation,thenaplantbyredifferentiation.Inthisexperimentweusetheexplantculturedinvitrotogeneratethecallusandtoberegeneratedtheplantbydifferentiation.关键词:全能性；组织培养；愈伤组织；分化培养；无菌操作

1前言：1前言：细胞是生物体的基本结构单位和功能单位。细胞工程就是利用细胞的全能性，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术[1]。细胞工程所涉及的基本内容,包括细胞培养、细胞融合、细胞核移植、染色体添加、细胞器转移、胚胎分割、动植物克隆等一系列技术[2]。在植物学界，早在1902年德国的植物学家哈泊兰德就预言植物细胞的全能性。1934年荷兰的植物学家温特发现生长素，并证实了对植物细胞培养的作用。1937年，在法国巴黎的Gautheret实验室、格勒诺布尔的Nobecourt实验室和普林斯顿的White实验室等几个实验室几乎同时获得植物培养物的愈伤组织并长期培养成功[3]。这是植物细胞与组织的首次成功。1960年，英国诺丁汉大学科金教授创造性地应用酶解的方法，首次成功地从番茄幼苗的根部制备到大量的原生质体。在此基础上，1972年美国的卡尔森等人用NaNO3作为融合诱导剂，将来自不同种的两个烟草原生质体进行融合，获得了世界上第一个体细胞杂种植株[1]。细胞工程技术给医学、农牧业带来巨大的变革。诸如组织培养等生物技术只需小量投资就可开发，但却能给农民带来实在的利益[4]。植物细胞和组织培养的技术性强，要求无菌操作，通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术，加深对无菌操作的了解,掌握植物愈伤组织诱导培养技术和调控条件，了解器官分化和植株再生的过程。

2材料与方法：材料：烟草无菌苗、烟草叶片愈伤组织方法：2.1培养基制备一般矿质盐浓度较高的基本培养基如MS,B5及改良培养基均可用于诱导愈伤组织[5]。本实验用的是MS培养基，它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。每个组配2000mL的培养基:向锅中依次加入培养基母液:大量元素100mL微量元素20mL铁盐20mL维生素20mL肌醇10mL甘氨酸10mLBA和NAA各8mL加入1800mL蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5N的NaOH和0.5N的HCl调整PH至；加入14g琼脂,将锅置于电炉上,搅拌加热使其完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2000mL,继续加热使之混合均匀后分装于三角瓶中，用记号笔写上学号，姓名和日期；

分装好的培养基于121°C灭菌20min左右，置于无菌室保存备用。2.2愈伤组织诱导将手洗净，用75%酒精将手消毒，再进入超净工作