DB22_T1589-2012_高粱品种鉴定DNA指纹法（SSR）_吉林省.docxVIP

ICS65.020

B05

DB22

备案号：35077-2012

吉林省地

方

标

准

DB22/T1589—2012

高粱品种鉴定DNA指纹法（SSR）

Identificationofsorghum(Sorghumbicolor(L.)Moench)varietiesusingDNA

fingerprintingmethod(SSR)

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T1589—2012

前

言

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省农业委员会提出并归口。

本标准起草单位：吉林省农业科学院农业部植物新品种测试(公主岭)分中心、农业生物技术研究所。

本标准主要起草人：李晓辉，王凤华，张春宵，周海涛，郝彩环，王威，侯佳明，王晶。

I

DB22/T1589—2012

高粱品种鉴定DNA指纹法（SSR）

1范围

本标准规定了利用简单重复序列（SSR,simplesequencerepeat）分子标记进行高粱(Sorghumbicolor

(L.)Moench)品种DNA指纹鉴定的试验方法、数据采集、结果记录及判定标准。

本标准适用于高粱各类材料的DNA分子数据采集和品种鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则

下列术语和定义适用于本文件。

核心引物coreprimer

多态性、稳定性、重复性等综合特性好，可作为DNA指纹鉴定优先选用的一套SSR引物，包括基本核

心引物和扩展核心引物。基本核心引物是用于品种建库和鉴定，并且保证不同实验室数据具有可比性，

可进行数据整合的一套统一固定引物。扩展核心引物是可根据引物的最新研究结果和特殊鉴定性状进行

调整的一套相对固定的引物。

参照品种referencecultivar

用于确定等位变异，校正仪器设备的系统误差,对应于特定SSR位点上大小已知的不同等位变异的一

组品种。

从高粱种子、幼苗、叶片等组织中提取DNA，利用普通或荧光染料标记的SSR引物进行PCR扩增。

不同长度的PCR扩增片段通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，经硝酸银染色或者荧光染料标记检测区分

开来。不同高粱品种由于遗传组成不同，在基因组DNA的多个SSR位点中，一些位点的简单重复序列的

重复次数有差异，这种差异可通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳区分，从而对不同品种进行区分鉴定。

1

DB22/T1589—2012

5试剂与材料

除另有说明外，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1十六烷基三乙基溴化铵（CTAB:C16H33(CH3)3NBr）。

5.1.2乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2·2H2O:C10H14N2Na2O8·2H2O）。

5.1.3三羟甲基氨基甲烷（tris-base:C4H11NO3）。

5.1.4氢氧化钠（NaOH）。

5.1.5氯化钠（NaCl）。

5.1.6琼脂糖（agarose）。

5.1.7溴酚蓝（brphblue:C19H10Br4O5S）。

5.1.8二甲苯青FF（C25H27N2O6S2Na）。

5.1.9甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide:(H2C=CHCONH)2CH2）。

5.1.10丙烯酰胺（C3H5NO）。

5.1.11硼酸（boricAcid:H3BO3）。

5.1.12尿素（CH4N2O）。

5.1.13过硫酸铵（APS:(NH4)2S2O8）。

5.1.14乙酸铵（CH3COONH4）。

5.1.18异戊醇（C5H12O）。

5.1.23矿物油。

5.1.30甲醛溶液（CH2O）:37%。

5.1.31DNA分子量标准:DL2000。

2

DB22/T1589—2012

5.2.1DNA提取试剂的配制

5.2.1.1EDTA溶液（0.5mol/L）

186.1gEDTA-Na2·2H2O溶于800mL水中，用NaOH调pH值至8.0，定容至1000mL，103.4kPa灭菌。

5.2.1.2Tris-HCl溶液（1mol/L）

60.55gTris-ba