YibT介导RpoS调控鼠伤寒沙门菌毒力变化的分子机制.pdfVIP

本研究由

河南省自然科学基金面上项目（222300420510）

提供资助

摘要

鼠伤寒沙门菌（Salmonellatyphimurium）属于肠杆菌科中一种革兰氏阴性杆菌，

沙门菌在生态环境中广泛分布，对公共卫生构成严重威胁，其不仅会污染动物源性食

品，也可通过受污染的农产品或加工食品迅速传播给动物及人类，从而导致食源性疾

病的爆发。因此，对沙门菌的研究和监控对于预防和控制食源性疾病和兽医公共卫生

安全意义重大。实验室前期研究发现，在麝香草酚的选择压力作用下，沙门菌的一种

未知因子YibT的蛋白，其表达水平显著下降，试验发现yibT基因缺失后，沙门菌生物

膜形成能力显著下降，yibT基因在沙门菌致病过程中的具体功能尚未明确，因此有必

要了解其在沙门菌的毒力因子表达、宿主适应性等方面可能存在的生物学调控作用，

从而为沙门菌有效控制及新兽药开发提供一定的理论支撑。

本研究采用λ-Red同源重组系统及表达质粒pET28a构建了鼠伤寒沙门菌rpoS基因

缺失株STΔrpoS，以及双基因缺失株STΔrpoSΔyibT，同时构建了回补株

STΔrpoS/prpoS、STΔrpoSΔyibT/prpoS及过表达株STΔrpoS/prpoS，基于表达质粒

pKP302rpoSyibT

构建、基因启动子表达载体，对各个突变菌株的生长特性、黏附力、

侵袭力、毒力变化及致病性等生物学特性进行研究，并通过β-半乳糖苷酶试验检测

rpoSyibTrpoSyibT

和基因之间上下游调控关系，以确证、在沙门菌生长过程中的生物

学作用，以探讨yibT对沙门菌毒力变化的调控机制。

研究结果表明，缺失株STΔrpoSΔyibT生长缓慢，且生物膜形成能力显著下降，基

因缺失株能稳定遗传，各组沙门菌对诸多抗微生物类药物及抗菌类天然化合物的耐药

性均无明显差别；透射电子显微镜发现，当rpoS、yibT基因缺失后沙门菌鞭毛减少，

PCRyibTrpoS

细胞膜表面产生芽胞。实时荧光定量结果表明，和基因之间疑似存在反

向调控关系；β-半乳糖苷酶实验结果证实，yibT基因受rpoS基因调控，处于信号通路

的下游。

yibTrpoS

细胞病理模型实验结果显示，、基因缺失后沙门菌的侵袭、黏附及胞内

存活能力明显下降，小鼠感染实验中，基因缺失株在肝脏中载菌量显著下降，经槲皮

素干预治疗后，在肝脏及脾脏中的载菌量进一步下降；研究发现沙门菌在肝脏中的载

yibTrpoS

菌量平均高于脾脏及回肠组织，流式细胞术检测结果表明，当、基因缺失后

沙门菌对机体的致病能力明显降低。

I

ybiT基因在鼠伤寒沙门菌的黏附及侵袭能力调控中发挥重要作用，当其缺失后，

沙门菌的毒力减弱，并伴随着对实验小鼠致病力的降低。综上所述，yibT可能通过直

接或间接作用于转录调控因子rpoS，参与到调控沙门菌毒力变化和机体致病性的复杂

调控网络之中。本文为进一步阐明yibT调控沙门菌致病性的分子机制提供了一定的理

论参考。

关键词：鼠伤寒沙门菌，突变株，致病性，毒力因子

II

ABSTRACT

SalmonellatyphimuriumbelongstotheEnterobacteriaceaefamilyasaGram-