DB51T 1203-2011 马铃薯M病毒、马铃薯S病毒检疫鉴定技术规程　.docxVIP

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DB51

四川省地方标准

DB51/T1203—2011

马铃薯M病毒、马铃薯S病毒检疫鉴定技术规程

DetectionandIdentificationofPotatoVirusMandPotatoVirusSforQuarantine

2011-01-25发布2011-03-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T1203—2011

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5试剂与材料 1

6仪器及用具 3

7取样 3

8实验室检验 3

9结果判定 4

10样品保存 4

附录A(资料性附录)马铃薯M病毒、马铃薯S病毒基本信息 5

附录B(资料性附录)马铃薯M病毒DAS-ELISA检验程序 6

附录C(资料性附录)马铃薯S病毒DAS-ELISA检验程序 8

附录D(资料性附录)马铃薯M病毒RT-PCR检验程序 10

附录E(资料性附录)马铃薯S病毒RT-PCR检验程序 12

II

DB51/T1203—2011

前言

本标准分为范围、规范性引用文件、术语和定义、原理、试剂与材料、仪器及用具、取样、实验室检验、结果判断、样品保存等部分。

本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站。

本标准主要起草人：宁红、万佳、刘可、郭迪金、吴志平、黄玲、李耄

1

DB51/T1203—2011

马铃薯M病毒、马铃薯S病毒检疫鉴定技术规程

1范围

本标准规定了马铃薯M病毒(见附录A)、马铃薯S病毒(见附录A)的取样、实验室检验、结果判断及样品保存的技术要求和方法。

本标准适用于马铃薯感染马铃薯M病毒、马铃薯S病毒的检验和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB15569-2009农业植物调运检疫规程

DB51/T868-2009马铃薯卷叶病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯A病毒检验鉴定技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

目标条带targetband

根据某种病毒RNA序列中一段保守的、特异的碱基序列设计特异引物，通过RT-PCR扩增和电泳检测，得到的与引物设计长度吻合的RT-PCR扩增条带。目标条带的存在，是判断某种病毒存在的标准。本标准中PVM的目标条带为630bp,PVS的目标条带为435bp。

注：改写DB51/T868-2009,定义3.6。

4原理

两种病毒田间通过蚜虫和农事操作进行传播，远距离主要通过人为的引种、商品流通等途径传播，带毒块茎和种苗是该病毒远距离传播的主要载体，两种病毒具有潜隐性，根据病害症状很难确定马铃薯M病毒和马铃薯S病毒的病毒种类，薯块上一般不表现症状。采用免疫学和分子生物学方法，可快速根据有关判断标准进行马铃薯M病毒、马铃薯S病毒检验鉴定。

5试剂与材料

除非另有说明，在本标准中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

5.1免疫学检验试剂

5.1.1捕捉抗体(Captureantibody)

5.1.1.1马铃薯M病毒免疫球蛋白，抗体稀释度按市售产品要求进行。贮藏于4℃条件下备用。

2

DB51/T1203—2011

5.1.1.2马铃薯S病毒免疫球蛋白，抗体稀释度按市售产品要求进行。贮藏于4℃条件下备用。

5.1.2酶标抗体(Alkalinephosphataseenzymeconjugate)

5.1.2.1用碱性磷酸酶标记的马铃薯M病毒的免疫球蛋白抗体。按市售产品要求进行稀释，贮藏于4℃条件下备用。

5.1.2.2用碱性磷酸酶标记的马铃薯S病毒的免疫球蛋白抗体。按市售产品要求进行稀释，贮藏于4℃条件下备用。

5.1.3包被缓冲液(Coatingbuffer)取2.93g碳酸氢钠(NaHCOs)、1.59g碳酸钠(Na?CO?)、0.2g叠氮化钠(NaN?),用1000mL蒸馏水溶解，并调pH值到9.6,贮藏于4℃条件下备用。

5.1.4洗涤液(PBSTBuffe