DB51T 2467-2018 鲫疱疹病毒II型病诊断技术规程.docxVIP

1

ICS65.150B52

DB51

四川省地方标准

DB51/T2467—2018

鲫疱疹病毒I型病诊断技术规程

2018-04-18发布2018-05-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T2467—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂和材料 2

5设备和器械 2

6临床检查 2

7实验室样品采集 2

8病毒的分离 2

9病毒鉴定 3

10综合判定 4

附录A(规范性附录)试剂配方 5

附录B(资料性附录)CyHV-2解旋酶基因参考序列(1446bp) 6

Ⅱ

DB51/T2467—2018

前言

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规定进行编写。本标准中附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：四川农业大学。

本标准起草人：耿毅、余泽辉、陈德芳、邓梦玲、黄小丽、欧阳萍、郑李平。

1

DB51/T2467—2018

鲫疱疹病毒11型病诊断技术规程

1范围

本标准规定了鲫疱疹病毒II型病诊断的术语与定义、试剂和材料、临床检查、实验室样品采集、病毒分离、病毒鉴定和综合判定等技术规程。

本标准适用于鲫(Carassiusauratus)与金鱼疱疹病毒II型病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于文件的应用时必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T18088出入境动物检疫采样

SC/T7014水生动物检疫实验技术规范

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于此文件。3.1

鲫疱疹病毒11型Cyprinidherpesvirus2,CyHV-2

是一种感染鲫鱼及其变种(金鱼、异育银鲫与彩鲫等)的高致病性病毒，又称金鱼造血器官坏死病毒(Goldfishhaematopoieticnecrosisvirus,GFHNV)或疱疹病毒性造血器官坏死病病毒(Herpesviralhaematopoieticnecrosisvirus,HVHNV)。

3.2

巢氏PCRNestedPolymeraseChainReaction

巢氏聚合酶链氏反应。3.3

CPECytopathiceffect

细胞病变效应。

3.4

GFFGoldenfishfin

金鱼鳍细胞系。

2

DB51/T2467—2018

4试剂和材料

4.1水

用水应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2试剂与培养基

按GB/T4789.28与SC/T7014规定执行，金鱼鳍细胞系(GFF)、小牛血清(FBS)、M199营养液、青霉素、链霉素。Taq酶、dNTPs、Mix-reactionbuffer、DNA分子量标准参照物(1000bpDNAMaker)与核酸提取试剂盒选用专业试剂公司提供的商品化试剂，上述未提及的见附录A。

4.3巢氏PCR引物

DNA解旋酶基因巢氏PCR扩增引物外，P1-F:5-TGAAATGTCAAAAGTGGATGG-3’,P1-R:5-TATTCCCAGACAGCCTTCAAA-3’,扩增片段大小716bp;

内引物，P2-F:5-GAACACCGCTGCTCATCATC-3’,P2-R:5-ACTCTTCGCAAGTCCTCACC-3’,扩增片段大小357bp。-20℃保存。

5设备和器械

主要设备与器械如下：

解剖盘、剪刀、镊子和手术刀、组织匀浆器、普通光学显微镜、电子天平、高压灭菌锅、超净工作台、一次性滤器(0.22μm)、普通冰箱、超低温冰箱、倒置显微镜、高速冷冻离心机、微量移液器、PCR扩增仪、水平电泳系统、凝胶成像系统与CO?培养箱等。

6临床检查

6.1临床症状

病鱼离群独游，摄食减