第20章毛细管电泳0428（药学）.pptxVIP

毛细管电泳技术：高效分离分析的微观世界欢迎了解毛细管电泳技术的奇妙世界。这一技术凭借其高效、快速的特点，已成为现代药学分析的重要支柱。本演示将深入探讨毛细管电泳的原理、应用及发展，揭示其在药物分析领域的独特价值。作者：

毛细管电泳概述定义毛细管电泳是一种在毛细管中利用电场驱动样品组分分离的高效分析技术。其核心是通过带电粒子在电场作用下的差异迁移实现分离。与传统技术比较样品需求量极少（纳升级）分离效率高（理论塔板数可达百万量级）分析速度快（通常几分钟内完成）操作简便，成本较低

毛细管电泳的发展历史11930年代Tiselius开发第一代电泳技术，奠定基础理论21967年Hjertén首次在旋转毛细管中实现区带电泳31981年Jorgenson和Lukacs开发现代毛细管电泳系统41990年代商业化仪器广泛应用于药学研究与质量控制52000年后微流控芯片电泳技术兴起，推动微型化发展

毛细管电泳的基本原理电泳迁移带电分子在电场作用下朝相反电极方向移动。正离子向阴极移动，负离子向阳极移动。迁移速度取决于分子的电荷与大小比值。电渗流缓冲液在石英毛细管内壁带负电荷表面附近的流动现象。通常从阳极流向阴极，可通过调节pH值或添加剂控制。总迁移分子实际迁移速度是电泳迁移与电渗流的矢量和。通过调控这两个力量，可实现复杂样品的高效分离。

电泳迁移详解影响因素分子电荷（与pH相关）分子大小与形状缓冲液离子强度电场强度温度迁移速率计算电泳迁移速率=μep×E其中:μep=电泳迁移率E=电场强度电泳迁移率=q/(6πηr)q=离子电荷η=溶液粘度r=离子半径

电渗流详解形成机制石英毛细管内壁硅醇基团电离带负电表面吸引缓冲液中正离子形成电双层结构影响因素缓冲液pH值（高pH增强EOF）离子强度（高浓度减弱EOF）有机溶剂添加（改变粘度）表面活性剂（改变壁面电荷）对分离的影响决定样品组分迁移方向影响分析时间改变分离选择性可能导致峰展宽

毛细管电泳仪器系统高压电源提供0-30kV直流电压，控制分离过程的驱动力毛细管内径25-100μm，长度20-100cm，是分离的核心场所进样系统通过电动、压力或重力方式将纳升级样品引入毛细管检测器紫外、荧光或电化学检测器，监测分离后的组分数据处理系统采集信号，生成电泳图，进行定性定量分析

毛细管材质选择熔融石英（最常用，透明度好）聚酰胺涂层（增强机械强度）特氟龙（降低EOF）玻璃（成本低但机械性能差）尺寸特点内径：25-100μm外径：150-375μm长度：20-100cm迁移距离：有效长度内壁修饰技术共价键结合（硅烷化）动态涂层（聚合物吸附）半永久性涂层（离子相互作用）目的：控制EOF，减少样品吸附

高压电源电压范围通常0-30kV，可正负极性切换，精确度需达±0.1%稳定性要求电流稳定性需≤0.5%，以确保迁移时间重复性电流限制功能自动监测电流变化，防止毛细管过热损坏电压编程能力支持梯度或阶梯电压变化，优化复杂样品分离

检测器激光诱导荧光检测器灵敏度最高，可达fg级电化学检测器高灵敏度，特异性强荧光检测器高灵敏度，ng级检测限紫外-可见光检测器最常用，通用性强

进样系统电动进样将样品瓶置于高压下，利用电迁移引入样品优点：选择性引入带电物质缺点：样品组分偏差压力进样利用正压或真空在毛细管两端产生压差优点：组分无偏差缺点：需要精确压力控制重力进样通过升高进样端产生流体静压差优点：简单经济缺点：进样精度较低

毛细管电泳的分离模式毛细管电泳拥有多种分离模式，可灵活应对不同样品特性。区带电泳、等速电泳、胶束电动色谱、凝胶电泳和等电聚焦各具特色。

区带电泳（CZE）均一缓冲液整个毛细管充满相同成分缓冲液电荷/质量分离组分根据电荷与质量比值差异迁移区带形成迁移速率不同的组分形成独立区带依次检测区带依次通过检测窗口产生信号峰

等速电泳（CITP）三电解质系统样品夹在引导电解质和终止电解质之间区带堆积各组分堆积成相邻区带，无间隔等速迁移所有区带以相同速度移动

胶束电动色谱（MEKC）添加表面活性剂在缓冲液中加入表面活性剂形成胶束分配平衡样品在胶束和水相间建立分配平衡双重迁移机制电渗流携带整个体系向检测器移动中性物质分离可实现无电荷分子的分离

毛细管凝胶电泳（CGE）原理在毛细管中填充凝胶或聚合物溶液，形成分子筛。分子通过凝胶网络迁移时，小分子移动快，大分子受阻移动慢。主要依据分子大小进行分离，电荷影响较小。常用填充物线性聚丙烯酰胺交联聚丙烯酰胺甲基纤维素聚乙二醇凝胶电泳是分析大分子如蛋白质、核酸的首选模式。

毛细管等电聚焦（CIEF）两性电解质毛细管充满载体两性电解质和样品混合物pH梯度形成通电后形成连续pH梯度，阳极低pH，阴极高pH蛋白质迁移至等电点蛋白质迁移至其等电点处净电荷为零，停止移动动员与