遗传病的诊断.pptVIP

第十二章遗传病的诊断;;;;第三节细胞遗传学检查

一、染色体检查

染色体检查适应指征：

智能发育不全、生长缓慢或伴有其他先天畸形者：原发闭经、男女不孕症者、两性内外生殖器畸形者。

夫妇中有染色体异常，如平衡易位、嵌合体等。

多发性流产的妇女及其丈夫。

家族中己发现染色体异常或先天畸形个体。

34岁以上的高龄孕妇。

二、性染色质检查

X染色质检查X染色质的检查可刮取口腔粘膜、阴道粘膜脱落上皮细胞，亦可采用绒毛或羊水中胎儿脱落细胞涂片，经硫堇或甲苯胺蓝染色，在光镜下计数X染色质数目。如Turner综合征X染色质为阴性，Klinefelter综合征X染色质为阳性。

Y染色质检查Y染色质检查适用于具有一个或一个以上Y染色体的个体或细胞群。如XYY男性有2个Y小体。;整条染色体涂染;第四节生物化学检查

检测酶的缺陷和代谢中间产物血和尿液

滤纸片和利用显色反响进行检测。例如:苯丙酮尿症患者的尿呈绿色，尿黑酸尿症患者的尿那么呈深棕色。;第五节基因诊断

基因诊断就是利用DNA重组技术直接从DNA水平上检测人类遗传性疾病的基因缺陷，因此这种诊断方法又称为DNA分析法。

常用基因诊断的技术：

分子杂交

聚合酶链反响(PCR)

聚合酶链反响-单链构象多态(PCR-SSCP)

RFLP分析;基因诊断;Southern印迹法(直接分子杂交法〕;HbS镰型细胞贫血

CCTGTGGAG;RFLP法〔间接分子杂交连锁分析法〕;RFLP连锁分析检测成年型多囊病APKD;12.5kb;产妇陈某某，34岁，广东籍，第3胎。第1胎流产，第2胎足月分娩一女婴，患HbH病;丈夫患a地中海贫血1，孕妇本人患a地中海贫血2。妊娠17周左右，用羊膜穿刺术取羊水20ml，并取孕妇及其丈夫、女儿抗凝静脉血各l0ml，制备染色体DNA，经琼脂糖凝胶电泳别离，通过DNA印迹法转移至硝酸纤维素膜上，与P标记的基因探针进行分子杂交，放射自显影结果如下图。;遗传标记;产生多态性的原因是内切酶位点的变化。

原位点的消失；新位点的产生。;2、第二代遗传标记—微卫星DNA(Micro-satelliteDNA)

属高度重复序列，重复单元2~6bp，重复区大多几十~几百bp，分散在基因组中，大多不存在于编码序列内，具有较高的多???性。呈现孟德尔式遗传。目前微卫星DNA已经发现了２万余个位点。;微卫星DNAPCR扩增结果〔例如〕：;2、第三代遗传标记—单核苷酸多态性(SNP)

某些DNA位点上，单个碱基存在着变化。如：;斑点杂交法等位基因特异性寡核苷酸杂交〔allele-specificoligonucleotide，ASO〕;异常探针

TAG;;二、聚合酶链反响技术;;;;;;我国α地中海贫血的发病由位于第16号染色体上的α珠蛋白基因簇的3种大片段的缺失所致(分别缺失20000ｂｐ,3700ｂｐ,4200ｂｐ),另有2种点突变只占很少一局部。在缺失断点两侧设计3个引物,可直接检出缺失并区分杂合子与纯合子;

;多重等位片段特异性扩增PCR技术

尽可能采用多对引物作PCR扩增〔多重PCR〕来检测。如扩增产物电泳后发现有带纹的缺失，即可作出诊断并对缺失定位。

DMD基因缺失的多重PCR诊断;单链构象多态性PCR(SSCP-PCR);对照实验