药物研发与毒性筛选(20151130).pptVIP

药物研发与毒性筛选黄芝瑛Tel：E-mail:

药物的根本要求平安、有效、质量可控有效安全质量可控Benefit/Risk药理学毒理学

毒理学的研究领域发现和识别外源性毒物的“潜在危害”的“证据”探讨作用原理，为解毒和平安使用提供“理论根底”系统的毒性研究，明确平安性范围。评价危险度评估和管理法规及措施的制订。描述性毒理学毒理机制应用毒理学管理和控制

21世纪毒性试验的开展毒性通路针对性试验毒性试验外源毒物的识别剂量反响建模与外推建模风险背景人群数据和暴露数据

毒性通路21世纪毒性实验分类针对性试验评价毒性通路的紊乱，而非顶端终点；强调采用细胞或细胞系，尤其是人源细胞的高通量试验方法；采用中通量实验法评价细胞的整体反响开展相关的实验，以评价代谢物、评估靶组织或者在基因组水平上进一步了解受到影响的细胞过程；限制体内研究的种类和期限，重点关注暴露时间不超出14天的研究；依据最新的化学品分类法，对代表性的受试物作更为详尽的测试

内源性激素(Endogenoushormones)DNA损伤(DNAdamage)抗氧化剂反响〔AntioxidantResponsePathway〕PXR、CAR、PPAR和AhR受体(PXR,CAR,PPARandAhRreceptors)低渗(Hypo-osmolarity)Nrf2氧化应激(Nrf2oxidativestress)热休克蛋白(Heat-shockproteins)P38MAPK(P38MAPK)。。。。。。的主要的毒性通路

新药研发的技术模式和研究路径的转变StrategyandImplementationPlanforAdvancingRegulatoryScienceforMedicinalProducts。2013，USFDA8个领域中的第一个：毒理学的现代化，促进革新基于动物实验的传统平安性评价方法，具体包括：开展平安性评价新方法研究：特别是基于生物标记物的评价技术。例如，将细胞、基因芯片、蛋白质组学和代谢组学数据与动物实验、临床研究整合。体外实验以及计算机辅助建模方法的研究细胞株、遗传工程改造的生物组织模型等方法的开发

发现毒理学研究 药物研究早期发现阶段，通过毒理学筛选和评价，及早地发现和淘汰有严重毒性问题、不适合开发的化合物，指导合成更平安有效的化合物。

意义药理和毒理学家同时采用快速、低耗、高通量筛选系统对一系列新化学物进行药效和毒性的同步筛选，找出候选化合物。确定NCEs的毒性作用机制和定量构效关系,指导化学家合成毒性较低的系列化合物。毒理学家基于该类化合物的毒性机制选出适宜的体内动物实验模型，进行体内毒性评价。减少动物，提高成功率降低费用，缩短周期

特点涵盖的毒理学终点广试验方法敏感性高使用的样品量少试验周期短试验技术方法易于掌握，试剂及仪器费用低有效降低新药研发的费用，加快研发进程不受GLP约束

主要技术手段药物毒性的早期优化筛选系统〔PreclinicalLeadOptimizationTechnologies,PLOTs)计算机模型或专家系统预测新化学实体的潜在毒性QSAR，insilicotoxicology“基因修饰”动物模型评价候选新药的毒性、致癌性及其毒作用机制毒理组学(-omics)技术研究药物的毒性机制

1、药物毒性的早期优化筛选系统〔PreclinicalLeadOptimizationTechnologies,PLOTs)

1)、一般毒性体外试验MTT法：线粒体脱氢酶活性XTT法：线粒体脱氢酶活性CCK-8法：线粒体脱氢酶活性LDH法：细胞膜的完整性中性红法：将染料摄入溶酶体的胞吞作用刃天青法：细胞的代谢活性苔盼兰排斥试验：细胞膜的完整性体内试验上下法

肝细胞毒性试验离体肝灌流：评价药物毒物在肝脏的代谢动力学，代谢产物情况，对肝脏的毒性作用以及对肝脏代谢酶的影响等精密切割的肝切片肝细胞培养：人肝细胞、大鼠原代肝细胞、HepG2细胞系离体的亚细胞成分胚胎干细胞〔ES〕定向分化成的肝细胞样细胞模型：利用人胚胎干细胞分化的肝细胞，一方面通过比较蛋白含量测定〔KB分析〕，细胞活性测定〔MTT分析〕观察药物对肝细胞增殖的影响；另一方面，选择受试药物刺激肝细胞，检测肝功能相关酶ALT、AST、ALP、LDH等；其三，检测细胞色素p450酶活性，观察药物对其影响。

ADME/T模型及药物相互作用模型(CYP450s、Pgp、Caco-2、Cocktail)应用Caco－2细胞模型评价药物和毒物的吸收情况、重复用药对药物吸收的转运蛋白的影响、药物对肠道细胞的毒作用以及药物吸收的毒性成份等。应用