第二章酶的生物合成法生产.pptVIP

1、大蒜愈伤组织的诱导选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，在4℃冰箱中放置3周，以打破休眠。去除外皮，先用70％乙醇消毒20s，再用0.1％氯化汞消毒10min，再用无菌水漂洗3次。在无菌条件下，切成0.5cm的小块，植入含有3mg/L2，4－D（2，4－二氯苯氧乙酸）和1.2mg/L6-BA(苄基酰嘌呤)的半固体MS培养基中，25℃，600lux,12h/d光照的条件下培养18d，诱导得到愈伤组织。第63页，共90页，星期日，2025年，2月5日(3)无机盐作用无机盐的主要作用是提供细胞生命活动所必不可缺的各种无机元素，并对细胞内外的pH值、氧化还原电位和渗透压起调节作用。分类根据细胞对无机元素需要量的不同，无机元素可以分为大量元素和微量元素两大类。大量元素主要有：磷、硫、钾、钠、钙、镁、氯等；微量元素是指细胞生命活动必不可少，但是需要量微小的元素，主要包括：铜、锰、锌、钼、钴、溴、碘等。微量元素的需要量很少，过量反而对细胞的生命活动有不良影响，必须严加控制。第31页，共90页，星期日，2025年，2月5日(4)生长因素生长因素是指细胞生长繁殖所必需的微量有机化合物，主要包括各种氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素以及动、植物生长激素等。在酶的发酵生产中，一般在培养基中添加含有多种生长因素的天然原料的水解物，如酵母膏、玉米浆、麦芽汁、麸皮水解液等，以提供细胞所需的各种生长因素；也可以加入某种或某几种提纯的有机化合物，以满足细胞生长繁殖之需。第32页，共90页，星期日，2025年，2月5日2．微生物发酵产酶的几种发酵培养基(1)枯草杆菌BF7658a-酶发酵培养基：玉米粉8％，豆饼粉4％，磷酸氢二钠0.8%，氯化钙0.2%，氯化铵0.15％(自然pH值)。（2）枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶发酵培养基：玉米粉4％，豆饼粉3％，麸皮3.2％，糠1％，磷酸氢二钠0．4％，磷酸二氢钾0.03％(自然pH值)。（3）黑曲霉糖化酶发酵培养基：玉米粉10％，豆饼粉4％，麸皮1％(pH4.4～5.0)。(4)地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶发酵培养基：玉米粉5.5％，豆饼4％，磷酸氢二钠0.4％，磷酸二氢钾0.03％(pH8.5)。第33页，共90页，星期日，2025年，2月5日(三)pH值的调节控制不同的细胞，其生长繁殖的最适pH值有所不同。细胞发酵产酶的最适pH值与生长最适pH值往往有所不同。有些细胞可以同时产生若干种酶，在生产过程中，通过控制培养基的pH值，往往可以改变各种酶之间的产量比例。随着细胞的生长繁殖和新陈代谢产物的积累，培养基的pH值往往会发生变化。第34页，共90页，星期日，2025年，2月5日在发酵过程中，必须对培养基的pH值进行适当的控制和调节。调节PH值的方法可以通过改变培养基的组分或其比例；也可以使用缓冲液来稳定pH值；或者在必要时通过滴加适宜的酸、碱溶液的方法调节培养基的pH值，以满足细胞生长和产酶的要求。第35页，共90页，星期日，2025年，2月5日(四)温度的调节控制不同的细胞有各自不同的最适生长温度。例如，枯草杆菌的最适生长温度为34～37℃，黑曲霉的最适生长温度为28～32℃等。有些细胞发酵量的最适温度与细胞生长最适温度有所不同，而且往往低于生长最适温度。第36页，共90页，星期日，2025年，2月5日在细胞生长和发酵产酶过程中，由于细胞的新陈代谢作用，会不断放出热量，使培养基的温度升高，同时，由于热量的不断扩散，会使培养基的温度不断降低。两者综合结果，决定了培养基的温度。由于在细胞生长和产酶的不同阶段，细胞新陈代谢放出的热量有较大差别，散失的热量又受到环境温度等因素的影响，使培养基的温度发生明显的变化。为此必须经常及时地对温度进行调节控制，使培养基的温度维持在适宣的范围内。第37页，共90页，星期日，2025年，2月5日温度的调节一般采用热水升温、冷水降温的方法。为了及时地进行温度的调节控制，在发酵罐或其他生物反应器中，均应设有足够传热面积的热交换装置，如排管、蛇管、夹套、喷淋管等，并且随时备有冷水和热水，以满足温度调控的需要。第38页，共90页，星期日，2025年，2月5日(五)溶解氧的调节控制调节溶解氧的方法主要有以下几种。(1)调节通气量(2)调节氧的分压提高氧的分压，可以增加氧的溶解度，从而提高溶氧速率。(3)调节气液接触时间(4)调节气液接触面积(5)改变培养液的性质第39页，共90页，星期日，2025年，2月5日(六)提高酶产量的措施1．添加诱导物诱导物一般可以分为3类：酶的作用底物、酶的催化反应产物和作用底物的类似物。2．控制阻