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刺龙牙组培快繁技术规程

1范围

本标准规定了刺龙牙组织培养的术语和定义、培养基制备、外植体采集及处理、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗及移栽、苗木质量分级及包装和运输等要求。

本标准适用于刺龙牙组织培养育苗生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

3术语和定义

LY/T1882界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1丛芽苗

培养材料在培养基上分化的多个基部相连的带芽小苗。

3.2过滤灭菌

对不耐高温的植物生长调节物质，采用滤膜过滤消除杂菌的方法。

4培养基制备

4.1培养基配方

4.1.1基本培养基

采用MS培养基，具体成分见附录A。

4.1.2诱导分化培养基

MS+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L。

4.1.3增殖培养基

MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.6mg/L+GA30.2mg/L+蔗糖30g/L。

4.1.4生根培养基

1/2MS+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L。

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4.2培养基配制

培养基配制方法参照LY/T1882。

4.3培养基灭菌

4.3.1高压灭菌

将培养基放入高压蒸汽灭菌器内灭菌，灭菌温度121℃,灭菌时间20min。

4.3.2过滤灭菌

添加GA3的培养基，应在高压灭菌后，待培养基冷却至50℃左右，在超净工作台加入经过滤灭菌的GA3。

4.4培养基保存

灭菌后的培养基在干净、阴凉的室内常温平放保存备用。

5外植体采集及处理

5.1母株选择

外植体的供体母株应是刺龙牙良种的优树原株或其无性系分株。

5.2外植体采集

选择无病虫害、生长健壮的植株，以当年生长度30cm～50cm的越冬枝条为材料，晴天下午将材料剪回，于温室水培至刚刚萌发，用刀切下嫩芽（带一块木质部），放在容器中，用流水冲洗干净。

5.3外植体消毒

外植体在超净工作台先用75%乙醇溶液浸泡消毒15s，无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞消毒10min，期间不断摇晃，用无菌水冲洗4次～5次，最后无菌滤纸吸干水分，置于无菌不锈钢小盘上。

6诱导培养

6.1外植体接种

在超净工作台上，用已灭菌的镊子和解剖刀剥去外植体鳞片和大部分幼叶，接种于已准备好的诱导分化培养基中，数量为4个/瓶。将瓶口封好，备注材料名称、编号、接种日期等，置于培养室培养30d~35d。

6.2芽诱导

在诱导培养基中诱导出不定芽后转接至继代增殖培养基。

6.3培养条件

温度:25±2℃,光照强度:1500lx～2000lx，光周期:12h～14h。

7继代培养

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7.1外植体继代培养

进行不定芽诱导培养的外植体，转接到新的诱导分化培养基中继代培养30d～35d，继代1次～2次，产生丛芽苗。

7.2芽苗继代培养

7.2.1继代接种

外植体诱导出的芽或者继代培养产生的丛芽苗进行切分，每块愈伤组织至少带有一个芽，接入增殖培养基，一般4块/瓶。

7.2.2继代周期

每隔30d～35d将继代苗转接至新鲜增殖培养基，继代培养控制在8代内，培养条件见6.3。

8生根培养

将生长健壮、高度3cm左右的丛生芽苗切分成单株，自基部切除全部愈伤组织，转接至生根培养基，接种数量10株/瓶，培养21d。

9炼苗及移栽

9.1选苗

选择苗高3cm～4cm、俱3片～5片绿叶、根数大于5、根长2cm以上、生长健壮的组培瓶苗进行炼苗。

9.2炼苗

在温室或者大棚内进行炼苗，温度控制在25±2℃,光照强度20000lx～30000lx，去除培养瓶的封口材料，开瓶锻炼2d～4d。

9.3移栽容器及基质

9.3.1容器规格

组培苗移栽容器选用规格为上口径3.4cm，底部1.5cm，深度4.0cm的穴盘。

9.3.2基质

移栽基质为草炭：蛭石：珍珠岩按照3:1:1的比例混合，装满穴孔，浇透水。

9.4洗苗

将组培瓶苗取出，用室温清水洗去根部培养基，整齐码放在泡沫箱中，保湿备用。

9.5移栽

用直径0.5cm木棍在穴盘上插孔，镊子扯住幼苗根部轻置于孔底，让根系尽量舒展，摆正小苗，用基质覆盖至组培苗基部，稍微压实，固定根系。

9.6管理

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9.6.1温湿度

将穴盘苗整齐摆放在遮阴50%的简易拱棚中，每天喷雾，保证拱棚内空气湿度90%以上，白天温度控制在23℃~30℃,夜间温度不低于15℃。移栽10d～14d即缓苗期过后逐渐揭膜通风，减少喷雾