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卷丹百合鳞片组培快繁技术规程

1范围

本标准规定了卷丹百合鳞片组培快繁过程中实验室设施与要求、培养基制备、外植体灭菌、接种、培养过程、炼苗移栽等技术措施要求。

本标准适用于辽宁省卷丹百合鳞片组培快繁生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1卷丹百合LiliumlancifoliumKerGawl.

卷丹百合，别名卷丹、虎皮百合，为百合科百合属多年生球根草本植物，上部叶腋具珠芽，花下垂，花被片反卷，橙红色，具紫黑色斑点。无性繁殖，方式有分球繁殖、珠芽繁殖、鳞片扦插、鳞片组织培养等。

3.2外植体Explant

从自然生长的活体植物上获取的用于建立组培快繁体系的起始材料。

3.3MS培养基MSMedium

MS培养基是一种基本培养基，含大量元素、微量元素、维生素、氨基酸、糖类、琼脂、水。市售干粉形态分为MS、MS+琼脂粉、MS+蔗糖、MS+琼脂粉+蔗糖等类型。

3.4诱导培养Inductionculture

将鳞片经过表面灭菌处理后接种在诱导培养基中培养，使其在无菌条件下形成不定芽。

3.5增殖培养Proliferationculture

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把经诱导培养获得的不定芽转接到增殖培养基中培养，使其不断分化产生新的不定芽或丛生苗。可经过多次增殖培养，获得大量芽苗。

3.6生根培养Rootingculture

芽苗增殖到一定数量后，转到生根培养基中诱导生根，使其转变成能够在温室或大田自养生存的植株。

4实验室设施与要求

试验室设计与设施按照NY/T2036-20134.1.3执行。

5培养基制备

5.1MS培养基粉称取与加热融化

按照说明书，根据配制数量称取含蔗糖（3%）和琼脂（0.7%）的MS培养基粉，放入锅中，加入自来水，搅拌加热至充分融化。

5.2植物生长调节剂配制与添加

植物生长调节剂的配制浓度为6-BA0.2～2.0mg/mL，NAA0.1～0.5mg/mL。保存于4℃冰箱中备用。

配制培养时，按照配方要求，量取配制好的植物生长调节剂，加入锅中，补足水，搅拌均匀。

5.3调节pH值

用0.1mol/L的NaOH溶液或0.1mol/L的HCl溶液调节pH值至5.8。

5.4分装

在超净台上，将配制好的培养基进行分装，规格为容量240ml的培养瓶，每瓶分装40ml；规格为100ml的三角瓶，每瓶分装30ml。分装后立即用密封盖盖住。

5.5灭菌

将分装好的培养瓶标明编号及日期，尽快进行高压灭菌，灭菌条件121℃灭菌20～25min。

5.6存贮

灭菌后的培养基冷却凝固后放置观察2～3d，按灭菌先后顺序使用，存储时间不超过一个月。

6组织培养过程

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6.1外植体选取及灭菌

取田间收获的鳞片完整无病虫害的卷丹百合种球，用洗衣粉水清洗干净，去除最外层干瘪、破损鳞片，剥取中层饱满鳞片，放置于纱网袋中，在流水下冲洗20～30min。

6.2外植体表面灭菌

在超净工作台上，将百合鳞片放在无菌瓶中，倒入75%酒精，持续搅拌30～40sec，倒出酒精。加入10%次氯酸钠溶液+500μL/L吐温-20摇晃8～10min后倒出。用无菌水冲洗4～5次，控好水后，盖上瓶盖。

6.3接种

在超净工作台上，用解剖刀将鳞片去掉尖部，横切成2～3块，放置于MS+0.5～1.5mg/L6-BA+0.1~0.2mg/LNAA诱导培养基表面，凹面向上，每瓶接2～3块。接种完毕立即盖上瓶盖，标注日期。

6.4诱导培养

接种后放入培养室内，在25℃、光照强度2000～2500Lx、16h光照/8h黑暗的条件下进行诱导培养。经过20～30d，在外植体小块的边缘萌生出数个不定芽。

6.5增殖培养

增殖培养基配方：MS+0.5～1mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LNAA。将诱导分化出的不定芽切成单

株，接于增殖培养基中，继续培养。经过连续2～3次增殖培养，每次30～35d，可获得大量组培苗。

6.6生根培养

将小鳞茎直径0.5～1cm的组培苗分成单株，接种于1/2MS+0.1～0.5mg/LNAA生根培养基上，培养30～40d生根后，即可炼苗。

7炼苗

当组培苗生长健壮、根数量达到5～6条、长度达到1～2