T CIQA 112—2025 动物源性食品中牛、羊和猪源性成分定性检测方法 CRISPR法.pdfVIP

ICS67.050

CCSX16

团体标准

T/CIQA112-2025

动物源性食品中牛、羊和猪源性成分定性检测方

法CRISPR法

Determinationofingredientsofcattle,sheepandpiginanimalfood–

CRISPRmethod

2025-04-25发布2025-04-25实施

中国出入境检验检疫协会发布

T/CIQA112-2025

动物源性食品中牛、羊和猪源性成分定性检测方法CRISPR法

1范围

本文件描述了动物源性食品中牛、羊和猪源性成分的CRISPR检测方法。

本文件适用于动物源性食品中牛、羊和猪源性成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403-2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

GB/T24777-2009化学品理化及其危险性检测实验室安全要求

SN/T5624-2023检测实验室质量安全风险管理通则

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

crRNA：规律间隔成簇短回文重复序列核糖核苷酸（CRISPRRNA）

CRISPR：规律间隔成簇短回文重复序列（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）

RPA：重组酶聚合酶扩增（recombinasepolymeraseamplification）

tracrRNA：反式激活CRISPRRNA（trans-activationCRISPRRNA）

4原理

通过CRISPR方法对动物产品中牛、羊和猪源性成分开展定性检测。首先采用RPA进行牛、羊和猪

源性基因特异性扩增，再用CRISPR反应特异性切割扩增产物，观察荧光值增量并给出结果判定。

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682二级水的要求。所有试

剂均用无DNA/RNA酶污染的容器分装。

5.1裂解液：20g/L十六烷基三甲基溴化铵,1.4mol/L氯化钠,0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,0.02

mol/L乙二胺四乙酸二钠二水合物,pH调至8.0。

5.2三氯甲烷。

5.3异戊醇。

5.4异丙醇。

5.5乙醇。

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5.610XNEBuffer2.1:100mM氯化钠,50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,10mM氯化镁,pH7.9。

5.7RNA酶抑制剂。

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5.8RPA反应使用RPA试剂盒，包括：

a）无引物再水和缓冲液

b）醋酸镁溶液